[發明專利]含有Fc的蛋白的純化方法

有效

• 申請號: 201780045463.1
• 申請日: 2017-07-21
• 公開（公告）號: CN109563125B
• 公開（公告）日: 2022-08-09
• 發明（設計）人: J.K.卡烏亞
• 申請（專利權）人: 美國安進公司
• 主分類號: C07K1/22
• 分類號: C07K1/22;C07K1/34;C07K16/00
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 初明明;黃希貴

1.一種用于純化包含Fc區的蛋白的方法，所述方法包括：

在蛋白與溫度響應性蛋白A材料結合的溫度使包含所述蛋白和一種或多種雜質的溶液與所述材料接觸；和

用洗脫緩沖液在4oC-25oC的溫度從所述材料中洗脫所述蛋白，所述洗脫緩沖液具有6.5至7.5的pH并且包含尿素或氯化胍，并且進一步包含山梨糖醇、脯氨酸和精氨酸，其中從所述溶液中的一種或多種雜質中純化所述蛋白。

2.如權利要求1所述的方法，其中所述洗脫緩沖液包含氯化胍。

3.如權利要求1所述的方法，其中所述洗脫緩沖液包含尿素。

4.如權利要求3所述的方法，其中所述尿素以2 M至4.5 M的濃度存在。

5.如權利要求4所述的方法，其中所述尿素以4 M的濃度存在。

6.如權利要求1所述的方法，其中所述山梨糖醇以2 M至2.5 M的濃度存在。

7.如權利要求1所述的方法，其中所述精氨酸和/或所述脯氨酸以0.25 M至1 M的濃度存在。

8.如權利要求1所述的方法，其中所述精氨酸和/或所述脯氨酸以0.5 M的濃度存在。

9.如權利要求1所述的方法，其中所述洗脫緩沖液進一步包含鹽。

10.如權利要求9所述的方法，其中所述鹽以0.25 M至0.8 M的濃度存在。

11.如權利要求9所述的方法，其中所述鹽是氯化鈉。

12.如權利要求11所述的方法，其中所述洗脫緩沖液包含2 M至4.5 M尿素、1 M至4.5 M山梨糖醇、0.25 M至1 M精氨酸、0.25 M至1 M脯氨酸、和0.25 M至0.8 M氯化鈉。

13.如權利要求12所述的方法，其中所述洗脫緩沖液包含4 M尿素、2.2 M山梨糖醇、0.5M精氨酸、0.5 M脯氨酸、和0.75 M氯化鈉。

14.如權利要求1所述的方法，其中所述洗脫緩沖液具有7.0至7.4的pH。

15.如權利要求1所述的方法，其中從所述材料中洗脫所述蛋白是在4oC的溫度進行的。

16.如權利要求1所述的方法，其中從所述材料中洗脫所述蛋白是在從20oC至25oC的溫度進行的。

17.如權利要求1所述的方法，其中所述溫度響應性蛋白A材料被固定在固相上。

18.如權利要求17所述的方法，其中所述固相是珠、樹脂、凝膠、薄膜、或顆粒。

19.如權利要求1所述的方法，其中使所述溶液與所述材料接觸是在4oC的溫度進行的。

20.如權利要求1所述的方法，所述方法進一步包括在從所述材料洗脫所述蛋白之前，用一種或多種洗滌溶液洗滌具有結合蛋白的所述材料。

21.如權利要求20所述的方法，其中所述一種或多種洗滌溶液包含濃度為0.5 M至2 M的氯化鈉。

22.如權利要求1所述的方法，其中所述包含Fc區的蛋白在哺乳動物細胞中重組產生。

23.如權利要求22所述的方法，其中所述哺乳動物細胞是中國倉鼠卵巢細胞。