[發明專利]細胞穿透肽(CPP)-介導的EV加載

在審

• 申請號: 201780043226.1
• 申請日: 2017-07-10
• 公開（公告）號: CN109689108A
• 公開（公告）日: 2019-04-26
• 發明（設計）人: O.維克蘭德;P.倫丁;D.古普塔
• 申請（專利權）人: 醫福斯治療有限公司
• 主分類號: A61K47/50
• 分類號: A61K47/50
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 彭昶;黃希貴

1.一種用至少一種藥理學試劑加載細胞外囊泡(EV)的方法，其包括將EV群體暴露于至少一種藥理學試劑和至少一種細胞穿透肽(CPP)。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述至少一種藥理學試劑和所述至少一種CPP以共價綴合物、非共價復合物和/或其組合的形式存在。

3.根據權利要求2所述的方法，其中包括在所述共價綴合物中的所述CPP和所述藥理學試劑通過化學鍵結合在一起，所述化學鍵選自包括以下的組：酯鍵、酰胺鍵、二硫鍵、硫醚鍵、生物素-鏈霉親和素鍵合或任何共價化學相互作用。

4.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其進一步包括電穿孔步驟和/或基于脂質的轉染試劑的使用。

5.一種用至少一種藥理學試劑加載EV的方法，其包括以下步驟：

i.將EV源細胞群體暴露于至少一種藥理學試劑和至少一種CPP；和，

ii.收獲由所述EV源細胞產生的EV，其中所述EV包括所述藥理學試劑。

6.根據權利要求5所述的方法，其進一步包括將步驟(i)與所述EV源細胞的電穿孔組合。

7.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中CPP和藥理學試劑之間的所述非共價復合物以具有正或負ζ電位的納米顆粒的形式存在。

8.通過根據前述權利要求中任一項所述的方法可獲得的EV。

9.一種EV，其包括與至少一種CPP綴合或復合的至少一種藥理學試劑。

10.一種EV，其包括至少一種藥理學試劑，其中所述至少一種藥理學試劑從所述EV內部的至少一種CPP綴合物和/或至少一種CPP復合物釋放。

11.根據權利要求8到10中任一項所述的EV，其中所述藥理學試劑是抗癌劑、細胞抑制劑、DNA或RNA嵌入劑、剪接調節劑、酪氨酸激酶抑制劑、他汀、NSAID、抗生素、抗真菌劑、抗菌劑、抗炎劑、抗纖維化劑、抗高血壓劑、芳香酶抑制劑、酯酶抑制劑、抗膽堿能劑、SSRI、BKT抑制劑、PPAR激動劑、HER抑制劑、AKT抑制劑、BCR-ABL抑制劑、信號轉導抑制劑、血管生成抑制劑、合成酶抑制劑、ALK抑制劑、BRAF抑制劑、MEK抑制劑、PI3K抑制劑、腦啡肽酶抑制劑、β2激動劑、CRTH2拮抗劑、FXR激動劑、BACE抑制劑、鞘氨醇-1-磷酸酯受體調節劑、MAPK抑制劑、刺猬(Hedgehog)信號傳導抑制劑、MDM2拮抗劑、LSD1抑制劑、內酰胺酶抑制劑、TLR激動劑、TLR拮抗劑、IDO抑制劑、ERK抑制劑、Chk1抑制劑、基于核酸的試劑(例如，寡核苷酸、siRNA、shRNA、反義寡核苷酸、剪接轉換寡核苷酸、mRNA、肽、天然產物、多肽)及其任何組合。

12.根據權利要求8到11中任一項所述的EV，其中所述CPP選自包括以下的組：轉運肽(transportan)、轉運肽10、穿透素(penetratin)、CADY肽(例如，CADY-1)、MTS、VP22、MAP、KALA、PpTG20、富含脯氨酸的肽、MPG肽、PepFect肽(例如，PF14、PF15、PF23、PF24、PF25、PF26、PF27、PF6)、Pep肽、Pip肽、L-寡聚物、降鈣素-肽、富含精氨酸的CPP(例如，多聚精氨酸)、Tat、胡蜂蜂毒肽、富含脯氨酸的肽、MPG肽及其任何組合。

13.根據權利要求8到12中任一項所述的EV，其進一步包括靶向部分。

14.根據權利要求13所述的EV，其中所述靶向部分包括表達為具有EV多肽的融合蛋白或附著到所述EV表面的抗體的氨基酸序列。