[發明專利]CD4CD8雙陽性T細胞的制備方法

在審

• 申請號: 201780039329.0
• 申請日: 2017-06-21
• 公開（公告）號: CN109415699A
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發明（設計）人: 金子新;安井裕;入口翔一;上田樹
• 申請（專利權）人: 國立大學法人京都大學
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;C12N5/0735;C12N5/074;C12N5/10
• 代理公司: 北京坤瑞律師事務所 11494
• 代理人: 封新琴

本發明提供一種CD4CD8雙陽性T細胞的制備方法，其包括以下工序：(1)在培養液中培養多能性干細胞，誘導造血祖細胞的步驟；(2)在含有p38抑制劑和/或SDF?1的培養液中培養上述步驟(1)中得到的造血祖細胞，誘導CD4CD8雙陽性T細胞的步驟。

技術領域

本發明涉及從造血祖細胞制備CD4CD8雙陽性T細胞的方法、從多能性干細胞制備CD4CD8雙陽性T細胞的方法、以及從該CD4CD8雙陽性T細胞制備CD8陽性T細胞的方法。

背景技術

認為T細胞在針對細菌或病毒等外來病原體或癌細胞等異常細胞的免疫系統中發揮中心作用，但由于各種原因而T細胞的功能發生降低，而變為易感染性或罹患癌癥等。如果能夠對于這樣的疾病進行免疫細胞等的補充、再生，則會成為對于疾病的病情改善或治療效果的提高等極為有效的手段。在這樣的免疫細胞的補充療法中，強烈要求負責細胞免疫的T淋巴細胞的功能補充、再生，但現在尚未建立有效的治療方法。

作為這樣的T淋巴細胞的補充療法，提出了將抗原特異性的T細胞受體(TCR)基因在各種淋巴細胞類細胞中進行基因導入，而補充或賦活*特異性免疫反應的方案(非專利文獻1或2)。在這些嘗試中，作為基因導入細胞，使用了作為骨髓祖細胞的CD34陽性細胞、天然T淋巴細胞等，但存在許多問題：它們在Ex-vivo中的自我再生能力低、基因導入的效率低、難以進行基于基因導入的分化的調節等。

另外，也提出了使用了從iPS細胞等多能性干細胞誘導而成的T淋巴細胞的補充療法(非專利文獻3或專利文獻1)。在從多能性干細胞誘導T淋巴細胞的方法中，提出了(1)從多能性干細胞誘導造血祖細胞的步驟、(2)從造血祖細胞誘導CD4CD8雙陰性細胞的步驟、(3)從CD4CD8雙陰性細胞誘導CD4CD8雙陽性細胞的步驟、以及(4)從CD4CD8雙陽性細胞誘導T淋巴細胞的步驟。

對于(1)的步驟，已知從多能性干細胞形成網狀結構物Sac(ES-sac)來制備造血祖細胞的方法(非專利文獻4)。另外，對于(2)和(3)的步驟，已知在OP9-DL1細胞層上用添加了IL-7和Flt-3L的培養基進行培養的方法(非專利文獻5或6)。此外，對于(4)的步驟，已知用添加了抗CD3抗體(OKT-3)和IL-2的培養基進行培養的方法。

另外，專利文獻2中公開了利用添加了維生素C類的培養液從多能性干細胞制備CD4CD8雙陽性T細胞的方法。

但是，利用這些方法從多能性干細胞制備T淋巴細胞的效率并不充分，希望進行改良。

現有技術文獻

專利文獻

專利文獻1：WO 2011/096482

專利文獻2：WO 2016/076415

非專利文獻

非專利文獻1：Gattinoni L,et al.,Nat Rev Immunol.6(5):383-393,2006非

專利文獻2：Morgan RA,et al.,Science.314(5796):126-129,2006

非專利文獻3：Nishimura T,et al.,Cell Stem Cell.12(1):114-126,2013.

非專利文獻4：Takayama N,et al.,Blood.111(11):5298-5306,2008

非專利文獻5：Timmermans F,et al.,J Immunol.182(11):6879-6888,2009

非專利文獻6：Ikawa T,et al.,Science.329(5987):93-96,2010

發明內容

發明要解決的問題