[發明專利]新型AAV8突變衣殼和含有其的組合物

在審

• 申請號: 201780037134.2
• 申請日: 2017-04-13
• 公開（公告）號: CN109661470A
• 公開（公告）日: 2019-04-19
• 發明（設計）人: J.M.威爾遜;Q.王
• 申請（專利權）人: 賓夕法尼亞州大學信托人
• 主分類號: C12N15/86
• 分類號: C12N15/86;C12N15/864;C07K7/06;C07K14/005
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 彭昶;羅文鋒

本文提供AAV8突變衣殼和包含所述AAV8突變衣殼的rAAV。在一個實施方案中，采用所述AAV8突變衣殼的載體顯示相較于AAV8，在所選組織中的轉導增加。

以電子形式提交的材料的引用并入

申請人據此以引用的方式將以電子形式隨本文一起提交的序列表材料并入。這個文件標記為“UPN-16-7726PCT_ST25.txt”。

發明背景

腺相關病毒(AAV)在人基因療法中具有極大前景，并且由于它能夠提供長期基因表達以及缺乏病原性而已被廣泛用于在各種研究中靶向肝、肌肉、心臟、腦、眼、腎和其它組織。AAV屬于細小病毒科，并且各自含有由兩個反向末端重復序列側接的單鏈DNA。已報道幾十種天然存在的AAV衣殼，它們的獨特衣殼結構使得它們能夠識別和轉導不同細胞類型和器官。

自從始于1981年的首個試驗以來，在基于腺相關病毒(AAV)載體的基因療法的臨床試驗中，尚未報道任何載體相關毒性。AAV載體在臨床試驗中不斷積累的安全性記錄聯合經證明的功效顯示AAV是用以共同操作的良好平臺。另一具有吸引力的特征是AAV相對易于操作，因為AAV是具有小型基因組(約4.7kb)和簡單遺傳組分–反向末端重復序列(ITR)、Rep和Cap基因的單鏈DNA病毒。在AAV載體中僅需要ITR和AAV衣殼蛋白，其中ITR充當用于載體產生的復制和包裝信號，而衣殼蛋白通過形成衣殼以容納載體基因組DNA，決定組織向性，以及將載體基因組DNA遞送至靶標細胞中來起主要作用。已主要存在四種方式來獲得AAV衣殼基因：從培養物或組織樣品分離AAV，AAV定向進化，改組以及合理設計。

已顯示AAV8會有效轉導肝、肌肉。此外，在患有重度B型血友病的患者中，通過單次外周靜脈輸注達成的經AAV8介導的hFIX基因轉移始終導致FIX轉基因以治療水平長期表達，而無急性或持久毒性。

AAV載體在基因轉移中具有許多優勢，但仍然有一些問題待解決。因此，需要更有效的AAV載體。

發明內容

在一個方面，提供一種腺相關病毒。病毒包含AAV8突變衣殼。在一個實施方案中，衣殼具有序列SEQ ID NO:18，并且被稱為AAV3G1。在另一實施方案中，衣殼具有序列SEQ IDNO:20，并且被稱為AAV8.T20。在另一實施方案中，衣殼具有序列SEQ ID NO:22，并且被稱為AAV8.TR1。在另一方面，提供一種編碼如本文所述的衣殼的核酸。在一個實施方案中，衣殼由SEQ ID NO:17或與其共有至少95％同一性的序列編碼。在另一實施方案中，衣殼由SEQID NO:19或與其共有至少95％同一性的序列編碼。在另一實施方案中，衣殼由SEQ ID NO:21或與其共有至少95％同一性的序列編碼。

在另一實施方案中，包括AAV8突變衣殼的AAV至少包括vp3衣殼，其相較于天然AAV8(SEQ ID NO:34)在以下區域中的至少一個中具有突變：i.氨基酸263至267(SEQ IDNO:78)；ii.氨基酸457至氨基酸459；iii.氨基酸455至氨基酸459(SEQ ID NO:81)；或iv.氨基酸583至氨基酸597(SEQ ID NO:69)。在一個實施方案中，相較于AAV8，具有AAV8突變衣殼的AAV在靶標組織中具有增加的轉導。在一個實施方案中，靶標組織是肌肉、肝、肺、氣道上皮、神經元、眼或心臟。在另一實施方案中，相較于天然AAV8，具有AAV8突變衣殼的AAV具有增加的逃脫AAV中和抗體的能力。

在一個實施方案中，vp1和/或vp2獨特區域源于與提供vp3獨特區域的AAV(即AAV8)不同的AAV。在一個實施方案中，提供vp1和vp2序列的AAV是rh.20。在一個實施方案中，rh.20vp1序列是SEQ ID NO:88。

在另一實施方案中，AAV進一步包括AAV反向末端重復序列和異源性核酸序列，所述核酸序列可操作地連接至指導由所述異源性核酸序列編碼的產物在靶標細胞中表達的調控序列。