[發明專利]用于組織特異性表達的修飾的U6啟動子系統

在審

• 申請號: 201780033090.6
• 申請日: 2017-03-31
• 公開（公告）號: CN109714954A
• 公開（公告）日: 2019-05-03
• 發明（設計）人: S.Q.哈珀
• 申請（專利權）人: 全國兒童醫院研究所
• 主分類號: A01H5/00
• 分類號: A01H5/00;C07H21/02;C12Q1/68;C12Q1/70
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 彭昶;羅文鋒

1.一種核酸分子，其包含修飾的U6啟動子序列、包含至少一個去靶序列的miRNA的成熟引導鏈和在5'端處的5至6個胸苷。

2.根據權利要求1所述的核酸分子，其中所述去靶序列是miRNA-122或miRNA 208的結合位點。

3.根據權利要求1或2所述的核酸分子，其中所述修飾的U6啟動子序列至少包含近端序列元件(PSE)區域或遠端序列元件(DSE)中的取代、插入或缺失。

4.根據權利要求1或2所述的核酸分子，其中所述修飾的U6啟動子序列包含在PSE序列中在核苷酸-66處將胞嘧啶取代為胸苷、在核苷酸-57處將胞嘧啶取代為胸苷，并且在核苷酸-52處將胸苷取代為胞嘧啶。

5.根據權利要求1至4中任一項所述的核酸分子，其中所述miRNA的成熟引導鏈是miDUX4、miRN92、miRNA-17、miRNA-18a、miRNA-19a、miRNA-20a、miRNA-19b-1、mi-RNA-26a、miRNA-126、miRNA-335、let-7a和let-7b、miRNA-34、miR-34a、miRNA-10b、miRNA-208、miRNA-499、miRNA-195、miRNA-29a、miRNA-29b或miRNA-29c。

6.根據權利要求1至4中任一項所述的核酸分子，其中所述miRNA的成熟引導鏈包含SEQID NO：8482、SEQ ID NO：8372、SEQ ID NO：8371、SEQ ID NO：8370、SEQ ID NO：8367、SEQ IDNO：8366、SEQ ID NO：8365、SEQ ID NO：8219、SEQ ID NO：8218、SEQ ID NO：8152、SEQ IDNO：8147、SEQ ID NO：8145、SEQ ID NO：7397、SEQ ID NO：7396、SEQ ID NO：7395、SEQ IDNO：7108、SEQ ID NO：7107、SEQ ID NO：7106、SEQ ID NO：6633、SEQ ID NO：6631、SEQ IDNO：6622、SEQ ID NO：6619、SEQ ID NO：6609、SEQ ID NO：6608、SEQ ID NO：6568、SEQ IDNO：6561、SEQ ID NO：6560、SEQ ID NO：10971或SEQ ID NO：10972的核苷酸序列。

7.根據權利要求1至4中任一項所述的核酸分子，其中所述miRNA的成熟引導鏈是miDUX4。

8.根據權利要求1至4中任一項所述的核酸分子，其包含SEQ ID NO：1、2或10913-10968中的任一個的核酸序列。

9.一種載體，其包含根據權利要求1至8中任一項所述的核酸分子。

10.根據權利要求9所述的載體，其中所述載體是質粒、腺相關病毒、腺病毒、逆轉錄病毒、慢病毒、馬相關病毒、甲病毒、痘病毒、皰疹病毒、脊髓灰質炎病毒、辛德畢斯病毒或牛痘病毒。

11.一種重組腺相關病毒，其包含根據權利要求1至8中任一項所述的核酸分子。

12.根據權利要求11所述的重組腺相關病毒，其中AAV是AAV6、AAV rh.74或AAV-B1。

13.一種組合物，其包含根據權利要求9或10所述的載體或根據權利要求11或12所述的重組腺相關病毒。

14.一種抑制細胞中基因表達的方法，其包含使所述細胞與包含根據權利要求1至8中任一項所述的核酸分子的重組腺相關病毒或根據權利要求13所述的組合物接觸。