[發(fā)明專利]用于選擇高M6P重組蛋白的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201780028176.X
• 申請日: 2017-03-30
• 公開（公告）號: CN109196097A
• 公開（公告）日: 2019-01-11
• 發(fā)明（設計）人: 晃·V·杜;拉塞爾·戈喬爾
• 申請（專利權(quán)）人: 阿米庫斯治療學公司
• 主分類號: C12N9/26
• 分類號: C12N9/26
• 代理公司: 北京律誠同業(yè)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11006
• 代理人: 徐金國;吳啟超

描述了用于生產(chǎn)、捕獲、和純化重組人溶酶體蛋白的方法。此類重組人溶酶體蛋白可以具有高含量的甘露糖?6?磷酸殘基。還描述了包括此類重組人溶酶體蛋白的藥物組合物，以及此類重組人溶酶體蛋白的治療方法和用途。

技術(shù)領域

本發(fā)明的原理和實施例總體上涉及制造重組蛋白，特別是具有高含量的甘露糖-6-磷酸的溶酶體酶。

背景技術(shù)

溶酶體貯積失調(diào)是一組常染色體隱性遺傳疾病，其特征在于細胞的糖鞘脂、糖原、或黏多糖在細胞內(nèi)的區(qū)室(稱為溶酶體)內(nèi)的積累。患有這些疾病的個體攜帶編碼在催化一種或多種這些物質(zhì)的水解方面有缺陷的酶的突變基因，這些物質(zhì)隨后在溶酶體中積累。例如，龐貝氏病，又稱為酸性麥芽糖酶缺乏癥或糖原貯積癥II型，是若干種溶酶體貯積失調(diào)之一。溶酶體失調(diào)的其他實例包括戈謝病、GM1-神經(jīng)節(jié)苷脂貯積癥、巖藻糖苷貯積癥、粘多糖貯積癥、胡爾勒-施埃爾病(Hurler-Scheie disease)、尼曼-皮克A和B病(Niemann-Pick A和B)，以及法布里氏病(Fabry disease)。龐貝氏病還被分類為神經(jīng)肌肉疾病或代謝性肌病。

龐貝氏病的發(fā)病率被估計為在40,000人中約1例，并且是由GAA基因的突變引起的，該GAA基因編碼酶溶酶體α-葡糖苷酶(EC:3.2.1.20)，該酶也常被稱為酸性α-葡糖苷酶。酸性α-葡糖苷酶通過在溶酶體內(nèi)將糖原催化水解為葡萄糖來參與糖原(一種分支多糖，是動物中葡萄糖的主要儲存形式)的代謝。因為患有龐貝氏病的個體產(chǎn)生無活性的或具有減少的活性的突變的、缺陷的酸性α-葡糖苷酶，糖原分解發(fā)生緩慢或根本不發(fā)生，并且在不同組織的溶酶體中(特別是在橫紋肌中)發(fā)生糖原積累，導致了包括進行性肌無力和呼吸功能不全的廣譜臨床表現(xiàn)。組織(如，心臟和骨骼肌)特別受影響。

龐貝氏病可以在酶的缺乏程度、嚴重程度和發(fā)病年齡方面差別很大，并且已經(jīng)鑒定了在GAA基因中的超過500種不同的突變，它們中的許多引起不同嚴重程度的疾病癥狀。該疾病已經(jīng)被分類為以下廣泛類型：早發(fā)型或嬰兒型，以及晚發(fā)型。早發(fā)型疾病和較低酶活性通常與更嚴重的臨床病程相關。嬰兒型龐貝氏病是最嚴重的，是由完全的或接近完全的酸性α-葡糖苷酶缺乏引起，并且出現(xiàn)包括肌肉張力嚴重缺乏、虛弱、肝臟和心臟增大、和心肌病的癥狀。舌頭可能變得增大和突出，并且吞咽可能變得困難。多數(shù)染病的兒童在兩歲之前死于呼吸并發(fā)癥或心臟并發(fā)癥。晚發(fā)型龐貝氏病可以出現(xiàn)在大于12個月的任何年齡，并且其特征在于缺乏心臟損害和更好的短期預后。癥狀與進行性骨骼肌功能障礙相關，并且涉及全身性肌無力以及在軀干、近端下肢、和隔膜中的呼吸肌的消耗。一些成年患者缺乏主要癥狀或運動限制。預后通常取決于呼吸肌損害的程度。大多數(shù)患有龐貝氏病的受試者最終發(fā)展為需要使用輪椅和輔助通氣的身體衰弱的狀態(tài)，其中由于呼吸衰竭而經(jīng)常發(fā)生過早死亡。

針對龐貝氏病的最近的治療選項包括用重組人酸性α-葡糖苷酶(rhGAA)進行的酶替代療法(ERT)。常規(guī)的rhGAA產(chǎn)品在來自健贊公司(Genzyme,Inc.)的阿葡糖苷酶α(alglucosidase alfa)、或名下是已知的。ERT是貫穿患者一生所必需的慢性治療，并且涉及通過靜脈內(nèi)輸注來給予替代酶。該替代酶隨后在循環(huán)中轉(zhuǎn)運，并且進入細胞內(nèi)的溶酶體中，在溶酶體中該替代酶的作用是分解積累的糖原，補償內(nèi)源性缺陷突變型酶缺乏的活性，并且從而緩解該疾病癥狀。在患有嬰兒型龐貝氏病的受試者中，相比于歷史對照，顯示出用阿葡糖苷酶α的治療顯著改進存活率，并且在晚發(fā)型龐貝氏病中，與安慰劑相比，阿葡糖苷酶α已經(jīng)示出對6分鐘步行測試(6MWT)和用力肺活量(FVC)具有統(tǒng)計學顯著的影響(如果適度的話)。