[發(fā)明專利]用于選擇高M(jìn)6P重組蛋白的方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201780028176.X | 申請(qǐng)日： | 2017-03-30 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN109196097A | 公開(kāi)（公告）日： | 2019-01-11 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 晃·V·杜;拉塞爾·戈喬爾 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 阿米庫(kù)斯治療學(xué)公司 |
| 主分類號(hào)： | C12N9/26 | 分類號(hào)： | C12N9/26 |
| 代理公司： | 北京律誠(chéng)同業(yè)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11006 | 代理人： | 徐金國(guó);吳啟超 |
| 地址： | 美國(guó)新*** | 國(guó)省代碼： | 美國(guó);US |
| 權(quán)利要求書(shū)： | 查看更多 | 說(shuō)明書(shū)： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 人溶酶體 蛋白 藥物組合物 方法描述 磷酸殘基 重組蛋白 甘露糖 捕獲 治療 生產(chǎn) | ||
1.一種用于生產(chǎn)重組人溶酶體蛋白的方法，該方法包括：
在一種生物反應(yīng)器中培養(yǎng)宿主細(xì)胞，這些宿主細(xì)胞分泌重組人溶酶體蛋白；
從該生物反應(yīng)器去除介質(zhì)；
將該介質(zhì)過(guò)濾以提供濾液；
將該濾液加載到陰離子交換色譜(AEX)柱上，以捕獲該溶酶體蛋白；并且
從該AEX柱上洗脫第一蛋白產(chǎn)物。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中該重組人溶酶體蛋白是重組人α-葡糖苷酶(rhGAA)。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其中該rhGAA包括與SEQ ID NO:2具有至少95％一致性的氨基酸序列。
4.如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法，該方法進(jìn)一步包括：
將該第一蛋白產(chǎn)物加載到固定的金屬親和色譜(IMAC)柱上；并且
從該IMAC柱上洗脫第二蛋白產(chǎn)物。
5.如權(quán)利要求4所述的方法，該方法進(jìn)一步包括：
將該第二蛋白產(chǎn)物加載到第三色譜柱上；并且
從該第三色譜柱上洗脫第三蛋白產(chǎn)物。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其中該第三色譜柱選自陽(yáng)離子交換色譜(CEX)柱和尺寸排阻色譜(SEC)柱。
7.如權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的方法，其中對(duì)該介質(zhì)的過(guò)濾選自交替切向流過(guò)濾(ATF)和切向流過(guò)濾(TFF)。
8.如權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的方法，該方法進(jìn)一步包括使該第一蛋白產(chǎn)物、該第二蛋白產(chǎn)物、和該第三蛋白產(chǎn)物的一種或多種中的病毒失活。
9.如權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的方法，該方法進(jìn)一步包括將該第二蛋白產(chǎn)物或該第三蛋白產(chǎn)物過(guò)濾，以提供一種經(jīng)過(guò)濾的產(chǎn)物，并且用該經(jīng)過(guò)濾的產(chǎn)物填充小瓶。
10.如權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所述的方法，該方法進(jìn)一步包括將該經(jīng)過(guò)濾的產(chǎn)物凍干。
11.如權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)所述的方法，其中這些宿主細(xì)胞包括中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞。
12.如權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)所述的方法，其中這些宿主細(xì)胞包括CHO細(xì)胞系GA-ATB-200、或ATB-200-001-X5-14、或其次代培養(yǎng)物。
13.如權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)所述的方法，其中：
(i)至少90％的該第一蛋白產(chǎn)物、或該第二蛋白產(chǎn)物、或該第三蛋白產(chǎn)物結(jié)合至陽(yáng)離子非依賴性甘露糖-6-磷酸受體(CIMPR)或
(ii)至少90％的該第一蛋白產(chǎn)物、或該第二蛋白產(chǎn)物、或該第三蛋白產(chǎn)物包含攜帶單-甘露糖-6-磷酸(單-M6P)或雙甘露糖-6-磷酸(雙-M6P)的N-聚糖。
14.如權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)所述的方法，其中該rhGAA包括七個(gè)潛在的N-糖基化位點(diǎn)，至少50％的該rhGAA的分子在第一位點(diǎn)處包括帶有兩個(gè)甘露糖-6-磷酸殘基的N-聚糖單元，至少30％的該rhGAA的分子在第二位點(diǎn)處包括帶有一個(gè)甘露糖-6-磷酸殘基的N-聚糖單元，至少30％的該rhGAA的分子在第四位點(diǎn)處包括帶有兩個(gè)甘露糖-6-磷酸殘基的N-聚糖單元，并且至少20％的該rhGAA的分子在第四位點(diǎn)處包括帶有一個(gè)甘露糖-6-磷酸殘基的N-聚糖單元。
15.一種通過(guò)如權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)所述的方法而制得的重組蛋白產(chǎn)物。
16.一種藥物組合物，包括如權(quán)利要求15所述的重組蛋白產(chǎn)物和一種藥學(xué)上可接受的載體。
17.如權(quán)利要求16所述的藥物組合物用于治療溶酶體貯積失調(diào)的用途。
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