[發明專利]針對RSV的疫苗

在審

• 申請號: 201780021794.1
• 申請日: 2017-04-04
• 公開（公告）號: CN109069612A
• 公開（公告）日: 2018-12-21
• 發明（設計）人: J·P·M·朗格戴克;J·M·費爾哈亨
• 申請（專利權）人: 揚森疫苗與預防公司
• 主分類號: A61K39/12
• 分類號: A61K39/12
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司 72002
• 代理人: 王健

本發明涉及編碼融合前RSV F蛋白或其免疫活性部分的新穎核酸分子，其中該融合前RSV F蛋白包含SEQ ID NO:1或2的氨基酸序列。本發明進一步涉及該核酸分子或包含所述核酸分子的載體作為針對呼吸道合胞病毒(RSV)的疫苗的用途。

本發明涉及醫學領域。更具體地，本發明涉及針對RSV的疫苗。

背景技術

呼吸道合胞病毒(RSV)是一種高度傳染性的兒童呼吸道病原體，據信其致約200,000例兒童死亡/年。在2歲以下的兒童中，RSV占因呼吸道感染而住院的約50％，其中住院高峰發生在2-4月齡。據報道，幾乎所有兒童到兩歲時都會經歷RSV感染，并且一生中反復感染歸因于低的自然免疫力。在老年人中，RSV疾病負擔與由非大流行性A型流感感染引起的那些相似。當前不存在針對RSV的疫苗，但是由于疾病負擔高其是被希望的。

RSV是一種屬于肺病毒亞科的副粘病毒。它的基因組編碼各種蛋白質，包括稱為RSV糖蛋白(G)和RSV融合蛋白(F)的膜蛋白，它們是用于中和抗體的主要抗原靶標。

與RSV G蛋白不同，F蛋白在RSV菌株之間是保守的；這使它成為一種有吸引力的疫苗候選物，能夠引發廣泛地中和性抗體。F蛋白是跨膜蛋白，并且在病毒出芽期間從細胞膜摻入病毒體膜中。RSV F蛋白通過融合病毒和宿主細胞膜促進感染。在融合過程中，F蛋白從不穩定的融合前構象不可逆地再折疊成穩定的融合后構象。蛋白質前體F0在細胞內成熟期間需要通過弗林蛋白酶樣蛋白酶進行切割。有兩個弗林蛋白酶位點，切割這兩個位點導致p27肽的去除和兩個結構域的形成：N末端F2結構域和C末端F1結構域(圖1)。F2和F1結構域通過兩個胱氨酸橋連接。針對該融合蛋白的抗體可以防止細胞中的病毒吸收，并且因此具有中和作用。除了作為用于中和抗體的靶標外，RSV F還含有細胞毒性T細胞表位(Pemberton等人，1987，J.Gen.Virol.[基因病毒學雜志]68：2177-2182)。

盡管進行了50年的研究，仍然沒有針對RSV的許可疫苗。疫苗開發的一個主要障礙是20世紀60年代臨床試驗中使用福爾馬林滅活的(FI)RSV疫苗的疫苗強化疾病的遺留問題。FI-RSV接種疫苗的兒童未能免受自然感染的影響，并且受感染的兒童比未接種疫苗的兒童患有更嚴重的疾病，其中包括兩人死亡。這種現象被稱為“強化疾病”。

自從使用FI-RSV疫苗進行試驗以來，已經開始探索產生RSV疫苗的各種方法。嘗試包括RSV的經典活減毒冷傳代的或溫度敏感性突變株、(嵌合的)蛋白亞單位疫苗、肽疫苗和由重組病毒載體(包括腺病毒載體)表達的RSV蛋白。盡管這些疫苗中的一些顯示出有希望的臨床前數據，但由于安全性考慮或缺乏療效，沒有疫苗被許可用于人類。

因此，仍然需要有效的疫苗和對抗RSV的疫苗接種方法，特別是不會導致強化疾病的疫苗。本發明的目的是提供這類疫苗和以安全有效的方式接種對抗RSV的疫苗的方法。

發明內容

本發明提供了編碼穩定的RSV融合前F蛋白的新穎核酸分子，其中該RSV融合前F蛋白包含SEQ ID NO:1或2的氨基酸序列。

在某些實施例中，對編碼RSV融合前F蛋白的核酸分子進行密碼子優化，用于在人類細胞中表達。

在某些實施例中，編碼RSV融合前F蛋白的核酸分子包含SEQ ID NO:3或4的氨基酸序列。

本發明進一步提供了包含編碼RSV融合前F蛋白的核酸分子的載體，其中該RSV F蛋白包含SEQ ID NO:1或2的氨基酸序列。

在某些實施例中，該載體是人重組腺病毒。

在某些實施例中，該重組腺病毒屬于血清型26或35。

在某些實施例中，該重組人腺病毒在腺病毒基因組的E1區中具有缺失，在E3區中具有缺失，或在E1和E3區中都具有缺失。

在某些實施例中，該重組腺病毒具有在其5'末端包含序列CTATCTAT的基因組。