[發明專利]將物質導入植物的方法

有效

• 申請號: 201780018863.3
• 申請日: 2017-03-28
• 公開（公告）號: CN109310061B
• 公開（公告）日: 2022-10-04
• 發明（設計）人: 加藤紀夫;岡本龍史;木羽隆敏;戶田繪梨香
• 申請（專利權）人: 株式會社鐘化;公立大學法人首都大學東京;國立研究開發法人理化學研究所
• 主分類號: C12N15/09
• 分類號: C12N15/09;A01H5/00;A01H6/46
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 沈雪

1.一種將物質導入植物的方法，該方法包括：

通過以下工序(1-i)、(1-ii)或(1-iii)獲得經過酶處理的分離受精卵細胞，然后進行下述工序(2)，

(1-i)從包含植物的受精卵細胞的組織中分離受精卵細胞，然后，用含有植物組織分解酶的酶溶液對該受精卵細胞進行低效價條件處理；

(1-ii)用含有植物組織分解酶的酶溶液對包含植物的受精卵細胞的組織進行低效價條件處理，接著，將經過酶處理的受精卵細胞分離；

(1-iii)用含有植物組織分解酶的酶溶液對包含植物的受精卵細胞的組織進行低效價條件處理，同時將經過酶處理的受精卵細胞分離；

(2)將選自核酸、蛋白質及肽的物質導入得到的經過酶處理的分離受精卵細胞，

其中，(i)酶處理時間為3分鐘以上且60分鐘以下，

(ii)植物組織分解酶包含果膠酶，且工序(1)的酶處理時體系中的果膠酶的Unit/mL為60以下，

(iii)工序(1)的酶處理時體系中的果膠酶的Unit/mL×處理時間min為310以下，

所述植物為單子葉植物。

2.一種將物質導入植物的方法，該方法包括：

通過以下工序(1-iv)獲得經過酶處理的分離受精卵細胞，然后進行下述工序(2)，

(1-iv)從植物體中分離卵細胞及精細胞，使它們融合，從而制備受精卵，然后，用含有植物組織分解酶的酶溶液對該受精卵細胞進行低效價條件處理，(2)將選自核酸、蛋白質及肽的物質導入得到的經過酶處理的分離受精卵細胞，

其中，(i)酶處理時間為3分鐘以上且60分鐘以下，

(ii)植物組織分解酶包含果膠酶，且工序(1)的酶處理時體系中的果膠酶的Unit/mL為60以下，

(iii)工序(1)的酶處理時體系中的果膠酶的Unit/mL×處理時間min為310以下，

所述植物為單子葉植物。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其中，所述植物組織分解酶還包含選自纖維素酶、蛋白酶、半纖維素酶類、葡糖醛酸糖苷酶、酵母裂解酶、幾丁質酶、葡聚糖酶、木聚糖酶、半乳聚糖酶、阿拉伯聚糖酶及木質素分解酶、以及它們中2種以上的混合物。

4.根據權利要求1或2所述的方法，其中，植物選自玉米、小麥、大麥、稻及高粱。

5.根據權利要求1或2所述的方法，其中，植物為玉米B73或來源于B73的玉米品種。

6.根據權利要求1或2所述的方法，其中，在酶處理后120分鐘以內進行工序(2)的物質導入。

7.根據權利要求2所述的方法，其中，在精細胞融合后120分鐘以內進行工序(2)的物質導入。

8.根據權利要求1或2所述的方法，其中，工序(1)的酶處理時體系中的果膠酶的Unit/mL為1以下。

9.根據權利要求1或2所述的方法，其中，工序(1)的酶處理時體系中的果膠酶的Unit/mL×處理時間為30以下。

10.根據權利要求1或2所述的方法，其中，工序(2)的物質導入使用PEG法或電穿孔法進行。