[發明專利]合成測序中的多酚添加劑

有效

• 申請號: 201780018264.1
• 申請日: 2017-02-08
• 公開（公告）號: CN109196113B
• 公開（公告）日: 2022-10-04
• 發明（設計）人: J·奧列尼爾;M·G·珀伯斯特
• 申請（專利權）人: 奇根科學有限責任公司
• 主分類號: C12Q1/06
• 分類號: C12Q1/06;A61K31/404;G01N33/52
• 代理公司: 中國貿促會專利商標事務所有限公司 11038
• 代理人: 唐宏

1.一種摻入經標記的核苷酸的方法，包括：

a)提供

i)多個核酸引物和模板分子，

ii)聚合酶，

iii)裂解試劑，其包含還原劑和多酚化合物，其中所述多酚化合物選自沒食子酸、龍膽酸、鄰苯二酚和/或鄰苯三酚，和

iv)多個核苷酸類似物，其中至少一部分所述核苷酸類似物用通過可裂解的二硫化物接頭連接至堿基的標記物標記；

b)將至少一部分所述引物與至少一部分所述模板分子雜交，以產生雜交的引物；

c)將第一經標記的核苷酸類似物用所述聚合酶摻入到至少一部分所述雜交的引物中，以產生包含摻入的經標記的核苷酸類似物的延伸引物；

d)檢測所述摻入的經標記的核苷酸類似物；和

e)用所述裂解試劑裂解所述摻入的核苷酸類似物的可裂解接頭。

2.權利要求1的方法，其中所述裂解試劑的所述還原劑包括TCEP(三(2-羧乙基)膦)。

3.權利要求1的方法，其中步驟c)的所述摻入的核苷酸類似物還包含封閉3'-OH基團的可去除的化學部分。

4.權利要求3的方法，其中步驟e)的裂解去除了封閉3'-OH基團的可去除的化學部分。

5.權利要求4的方法，其中，所述方法還包括：

f)將第二核苷酸類似物用所述聚合酶摻入到至少一部分所述延伸的引物中。

6.權利要求1的方法，其中所述標記物是發熒光的。

7.裂解試劑用于在合成測序方法中裂解二硫化物接頭的用途，其中所述裂解試劑包含還原劑和多酚化合物，其中所述多酚化合物選自沒食子酸、龍膽酸、鄰苯二酚和/或鄰苯三酚。

8.權利要求7的用途，其中所述還原劑是TCEP(三(2-羧乙基)膦)。

9.一種試劑盒，其包含i)包含還原劑和多酚化合物的裂解試劑，其中所述多酚化合物選自沒食子酸、龍膽酸、鄰苯二酚和/或鄰苯三酚；和ii)多個核苷酸類似物，其中至少一部分所述核苷酸類似物用通過可裂解的二硫化物接頭連接至堿基的標記物標記。

10.一種系統，其包含與溶液中的模板雜交的引物，所述溶液包含包括還原劑和多酚化合物的裂解試劑，其中所述多酚化合物選自沒食子酸、龍膽酸、鄰苯二酚和/或鄰苯三酚。

11.權利要求10的系統，其中所述雜交的引物和模板是固定的。

12.權利要求10的系統，其中所述雜交的引物和模板在流動池中。

13.權利要求10的系統，其中所述還原劑是TCEP(三(2-羧乙基)膦)。