[發(fā)明專(zhuān)利]AKT-mTOR通路蛋白的檢測(cè)和量化有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201780017167.0 | 申請(qǐng)日： | 2017-03-13 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN108885215B | 公開(kāi)（公告）日： | 2022-11-25 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | B·B·帕特爾;J·C·羅杰斯 | 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人： | 皮爾斯生物科技有限公司 |
| 主分類(lèi)號(hào)： | G01N33/574 | 分類(lèi)號(hào)： | G01N33/574;G01N33/68;C07K14/00;C07K16/00 |
| 代理公司： | 上海專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100 | 代理人： | 陶家蓉;楊昀 |
| 地址： | 美國(guó)伊*** | 國(guó)省代碼： | 暫無(wú)信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | akt mtor 通路 蛋白 檢測(cè) 量化 | ||
1.一種用于檢測(cè)AKT-mTOR通路蛋白的方法，其包括：
a.從生物樣品分離AKT-mTOR通路蛋白；
b.分解所述分離的蛋白質(zhì)；
c.經(jīng)質(zhì)譜分析所述分解的蛋白質(zhì)，以確定存在用于AKT-mTOR通路蛋白的肽，其中所述用于AKT-mTOR通路蛋白的肽選自由SEQ ID No: 16, 37, 42, 73, 80, 91, 96, 98, 157,163, 195, 200, 204, 208和209組成的群組；以及
d.檢測(cè)所述樣品中的一種或多種AKT-mTOR通路蛋白，
其中步驟a的分離包括：
用選自表8和表9的一種以上的抗體處理所述生物樣品，其中所述表8的抗體鑒定非磷酸化的AKT-mTOR通路蛋白，所述表9的抗體檢測(cè)磷酸化的AKT-mTOR通路蛋白，且所述抗體免疫沉淀來(lái)自生物樣品的AKT-mTOR通路蛋白；
其中所述表8如下：
所述表9如下：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其另外包括確定所述AKT-mTOR通路蛋白的數(shù)量。
3.根據(jù)前述權(quán)利要求1或2中任一項(xiàng)所述的方法，其中檢測(cè)下限為在0.05至0.25 fmol的范圍內(nèi)，和/或其中定量下限為0.05至0.75 fmol的范圍內(nèi)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述AKT-mTOR通路蛋白為磷酸化的。
5.一種用于確定磷酸化的與非磷酸化的AKT-mTOR通路蛋白的比率的方法，其包括
a.用選自表9的一種或多種能夠免疫沉淀磷酸化的AKT-mTOR靶蛋白質(zhì)的抗體處理生物樣品，并用選自表8一種或多種能夠免疫沉淀非磷酸化的AKT-mTOR靶蛋白質(zhì)的抗體分別處理相同的所述生物樣品；
b.分解所述免疫沉淀的AKT-mTOR通路蛋白；
c.將已知量的可檢測(cè)地標(biāo)記的第一和第二內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)肽添加至所述分解的蛋白質(zhì)中，其中所述第一內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)肽具有與用于鑒定所述磷酸化的蛋白的磷酸化的AKT-mTOR通路肽相同的氨基酸序列，并且所述第二內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)肽具有與用于鑒定所述非磷酸化的蛋白的非磷酸化的AKT-mTOR通路肽相同的氨基酸序列；
d.經(jīng)質(zhì)譜分析所述分解的蛋白質(zhì)和所述內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)品，以確定所述磷酸化的和非磷酸化的AKT-mTOR通路肽的存在和數(shù)量，其中所述AKT-mTOR通路肽選自由SEQ ID No: 16, 37,42, 73, 80, 91, 96, 98, 157, 163, 195, 200, 204, 208和209組成的群組；以及
e.確定所述樣品中所述磷酸化的和非磷酸化的AKT-mTOR通路蛋白的數(shù)量，并且確定磷酸化的與非磷酸化的靶蛋白質(zhì)的比率，
其中所述表8如下：
所述表9如下：
。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的方法，其中所述生物樣品為人，為分離的細(xì)胞、血漿、血清、全血、CSF、尿、痰、組織或腫瘤組織。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的方法，其中所述肽被可檢測(cè)的標(biāo)記修飾，所述可檢測(cè)的標(biāo)記包括選自13C、15N、2H以及18O的同位素。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的方法，其中第一種所述抗體能夠免疫沉淀磷酸化的AKT-mTOR通路蛋白，第二種所述抗體能夠免疫沉淀通過(guò)第一種所述抗體沉淀的非磷酸化形式的AKT-mTOR通路蛋白。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的方法，其中步驟a）包括用能夠結(jié)合通路蛋白的標(biāo)記的抗體處理所述樣品，以提供標(biāo)記的抗體-蛋白質(zhì)綴合物；并且使所述標(biāo)記的抗體-蛋白質(zhì)綴合物結(jié)合能夠結(jié)合標(biāo)記的抗體的捕獲試劑，以從所述樣品分離靶蛋白質(zhì)，所述標(biāo)記是生物素并且所述捕獲試劑是鏈霉親和素。
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