[發(fā)明專利]MTRNR1基因突變的測定在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201780011996.8 | 申請日： | 2017-02-09 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN109072301A | 公開（公告）日： | 2018-12-21 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 祖延兵;應(yīng)儀如 | 申請（專利權(quán)）人： | 新加坡科技研究局 |
| 主分類號(hào)： | C12Q1/6883 | 分類號(hào)： | C12Q1/6883 |
| 代理公司： | 上海弼興律師事務(wù)所 31283 | 代理人： | 薛琦;黃益澍 |
| 地址： | 新加坡*** | 國省代碼： | 新加坡;SG |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 突變 等離子體 寡核苷酸探針 氨基糖苷類 金納米顆粒 受試者樣品 共價(jià)偶聯(lián) 聽力喪失 試劑盒 線粒體 可用 擴(kuò)增 嗎啉 并用 基因 檢測 自由 | ||
本發(fā)明涉及用于測定受試者樣品中人線粒體編碼的12S RNA(MTRNR1)基因的突變存在的方法和試劑盒，所述突變選自由1555A>G和1494C>T組成的組，尤其包括：擴(kuò)增至少部分MTRNR1基因并用共價(jià)偶聯(lián)到嗎啉代寡核苷酸探針的等離子體金納米顆粒檢測擴(kuò)增的DNA。要求保護(hù)的方法可用于測定受試者患氨基糖苷類引起的聽力喪失的風(fēng)險(xiǎn)。
本申請參考并要求2016年2月17日提交的新加坡專利申請No.10201601165V的優(yōu)先權(quán)，依據(jù)PCT細(xì)則第4.18條，其內(nèi)容通過引用并入本發(fā)明用于所有目的，包括不包含在本發(fā)明中的以及在PCT細(xì)則第20.5(a)條提及的說明書、權(quán)利要求或附圖的任何元素或部分。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明總體上涉及用于檢測人線粒體編碼的12S RNA(MTRNR1)基因(SEQ ID NO：1)中突變存在的方法和試劑盒。
背景技術(shù)
遺傳突變是兒童早期聽力喪失的主要原因。已知人線粒體基因MTRNR1(12S rRNA)中的兩種致病變體，即1555A>G和1494C>T，與暴露于氨基糖苷類引起的失聰密切相關(guān)。這種突變也是母性遺傳的，從一個(gè)女人傳給她所有的后代。
氨基糖苷類，包括鏈霉素、慶大霉素、卡那霉素、妥布霉素和新霉素，是通常用于治療細(xì)菌感染的抗生素。然而，眾所周知，這些抗生素也是耳毒性的。如果將氨基糖苷類抗生素施用于攜帶mtDNA 1555A>G或1494C>T突變的個(gè)體，即使藥物水平在正常范圍內(nèi)，他們也可能會(huì)遭受進(jìn)展快速的、嚴(yán)重的和永久性的聽力喪失。
因此，在用氨基糖苷類治療之前對(duì)致病性mtDNA變體進(jìn)行遺傳篩選，可能會(huì)提供關(guān)于氨基糖苷類引起的聽力喪失的風(fēng)險(xiǎn)信息。通過選擇替代性療法，可以預(yù)防易感個(gè)體的聽力喪失。
現(xiàn)有技術(shù)中已存在用于測定基因突變的各種技術(shù)。然而，仍然急切需要新技術(shù)來克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明通過提供一種新的用于測定人MTRNR1基因(SEQ ID NO：1)中突變存在的方法和試劑盒，從而滿足了上述本領(lǐng)域的需要。
在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種測定樣品中人線粒體編碼的12S RNA(MTRNR1)基因(SEQ ID NO：1)中突變存在的方法，其中所述突變選自由1555A>G和1494C>T組成的組，并且所述方法包括以下步驟：
(a)在允許擴(kuò)增產(chǎn)生PCR擴(kuò)增產(chǎn)物(擴(kuò)增子)的條件下，在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)中使用一對(duì)引物擴(kuò)增至少部分MTRNR1基因，所述部分包含突變狀態(tài)待分析的位置；
(b)在允許寡核苷酸類似物探針和擴(kuò)增子彼此雜交的條件下，將不同試管中的擴(kuò)增子分別與對(duì)野生型或突變的擴(kuò)增子特異的等離子體納米探針接觸，所述等離子體納米探針包括等離子體納米顆粒和與其共價(jià)偶聯(lián)的非離子寡核苷酸類似物探針，所述寡核苷酸類似物探針包含與野生型或突變的擴(kuò)增子互補(bǔ)的堿基序列，其中探針在與擴(kuò)增子雜交時(shí)產(chǎn)生可檢測信號(hào)，該信號(hào)可與未雜交探針的信號(hào)區(qū)分開；
(c)基于測定納米探針和擴(kuò)增子的雜交體的解鏈溫度Tm來確定突變的存在。
在各種實(shí)施方案中，在該方法的步驟(a)中使用的PCR是不對(duì)稱PCR(aPCR)。
在各種實(shí)施方案中，在該方法的步驟(b)中使用的等離子體納米探針包含的等離子體納米顆粒是等離子體金納米顆粒。
在各種實(shí)施方案中，在該方法的步驟(b)中使用的等離子體納米探針包含的非離子寡核苷酸類似物探針是嗎啉代寡核苷酸(MOR)探針。
在各種實(shí)施方案中，在該方法的步驟(b)中產(chǎn)生的可檢測信號(hào)是測定溶液的顏色，其指示探針是否與擴(kuò)增子雜交。
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