[發明專利]昆蟲細胞中的AAV產生、其方法和組合物在審
| 申請號： | 201780010098.0 | 申請日： | 2017-04-20 |
| 公開（公告）號： | CN108699567A | 公開（公告）日： | 2018-10-23 |
| 發明（設計）人： | 陳海峰 | 申請（專利權）人： | 威洛克有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/866 | 分類號： | C12N15/866;C12N7/01;C12N7/00;C12N5/10 |
| 代理公司： | 北京市鑄成律師事務所 11313 | 代理人： | 郗名悅;屈小春 |
| 地址： | 美國加*** | 國省代碼： | 美國;US |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 桿狀病毒 昆蟲細胞 重組桿狀病毒 連續傳代 表達盒 同源區 重組桿狀病毒感染 重組桿狀病毒載體 蛋白基因表達 起始密碼子 腺相關病毒 細胞 攜帶 | ||
1.一種桿狀病毒載體，其包含：
AAV Cap表達盒；
AAV Rep表達盒；以及
桿狀病毒同源區(hr)，其位于距離AAV表達盒的起始密碼子高達約4kb處。
2.根據權利要求1所述的載體，其按5'至3'的順序包含所述Cap表達盒、所述Rep表達盒和所述桿狀病毒同源區(hr)。
3.根據權利要求1所述的載體，其按5'至3'的順序包含所述Rep表達盒、所述Cap表達盒和所述桿狀病毒同源區(hr)。
4.根據權利要求1所述的載體，其按5'至3'的順序包含所述Cap表達盒、所述桿狀病毒同源區(hr)和所述Rep表達盒。
5.根據權利要求1所述的載體，其按5'至3'的順序包含所述Rep表達盒、所述桿狀病毒同源區(hr)和所述Cap表達盒。
6.根據權利要求1所述的載體，其按5'至3'的順序包含所述桿狀病毒同源區(hr)、所述Cap表達盒和所述Rep表達盒。
7.根據權利要求1所述的載體，其按5'至3'的順序包含所述桿狀病毒同源區(hr)、所述Rep表達盒和所述Cap表達盒。
8.根據權利要求1所述的載體，其中所述hr區位于所述Rep表達盒與所述Cap表達盒之間，并且其中所述Rep表達盒和所述Cap表達盒處于頭對頭(5'至5')取向。
9.根據權利要求1-8中任一項所述的載體，其中所述桿狀病毒同源區是hr2序列。
10.根據權利要求1-9中任一項所述的載體，其中所述載體不包含Rep結合元件(RBE)。
11.一種昆蟲細胞系，其包括包含根據權利要求1-10中任一項所述的載體的細胞。
12.根據權利要求11所述的昆蟲細胞系，其中所述細胞還包含第二載體，所述第二載體包含側接有AAV ITR的轉基因。
13.一種體外生長桿狀病毒的方法，所述方法包括：
提供根據權利要求11或權利要求12所述的昆蟲細胞培養物；以及
孵育所述細胞。
14.根據權利要求13所述的方法，其中所述孵育所述細胞包括使所述細胞傳代，并且其中與包含含有AAV Cap表達盒和AAV Rep表達盒但沒有桿狀病毒hr的桿狀病毒載體的對照昆蟲細胞系相比，第7代時的AAV產生產率高至少2倍。
15.根據權利要求13所述的方法，其中包含所述AAV Cap表達盒的桿狀病毒在第7代時的滴度大于總桿狀病毒滴度的21.5％。
16.一種體外生長AAV的方法，所述方法包括：提供昆蟲細胞培養物；
用根據權利要求1-10中任一項所述的桿狀病毒載體感染或轉染所述昆蟲細胞；以及
孵育所述細胞。
17.根據權利要求16所述的方法，其中來自所述昆蟲細胞的AAV的P7時的所述產率比來自包含不具有所述hr的桿狀病毒載體的昆蟲細胞的AAV的P7時的所述產率高至少50％。
18.根據權利要求16所述的方法，其中來自包含所述桿狀病毒hr的細胞的AAV的P7時的所述產率比來自包含不具有所述hr的桿狀病毒載體的細胞的AAV的所述產率高至少20％。
19.根據權利要求16所述的方法，其中所述桿狀病毒載體不包含Rep結合元件(RBE)。
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