[發明專利]用于純化纖維蛋白原的方法

有效

• 申請號: 201780006426.X
• 申請日: 2017-01-12
• 公開（公告）號: CN109071596B
• 公開（公告）日: 2022-03-11
• 發明（設計）人: 金俊植;金孝珍;樸芝允;李柱浩;孫載云;辛庸源
• 申請（專利權）人: 株式會社綠十字控股
• 主分類號: C07K1/30
• 分類號: C07K1/30;C07K1/34;C07K1/36;B01J20/08;C07K14/75;A61K38/36
• 代理公司: 北京坤瑞律師事務所 11494
• 代理人: 陳桉

1.一種用于純化纖維蛋白原的方法，所述方法包括以下步驟：

(a)通過將甘氨酸添加到含有纖維蛋白原的溶液中使甘氨酸的濃度為1.5至2.5M而使所述溶液的纖維蛋白原沉淀，然后去除上清液，并回收沉淀物；

(b)使步驟(a)的沉淀物溶解于溶解緩沖液中以獲得溶液，通過向其中添加甘氨酸使甘氨酸濃度為0.5至0.9M而使所述溶液沉淀，和回收上清液；

(c)通過向其中添加甘氨酸使甘氨酸濃度為1.5至2.5M而使步驟(b)的上清液沉淀，和回收沉淀物；和

(d)使步驟(c)的沉淀物溶解于溶解緩沖液中以獲得溶液，并使用納米過濾器使所述溶液經受納米過濾(NF)。

2.根據權利要求1所述的方法，其中，在步驟(b)和(d)中用于溶解所述沉淀物的所述溶解緩沖液包含pH 6.0至9.0的10至100mM檸檬酸鈉。

3.根據權利要求1所述的方法，其中，步驟(d)中的所述納米過濾在20至37℃在0.5至2.5bar的壓力下進行。

4.根據權利要求1所述的方法，其中，步驟(a)的所述含有纖維蛋白原的溶液通過包括以下步驟的方法獲得：

(i)使用溶解緩沖液溶解含有纖維蛋白原的低溫糊狀物以獲得溶液；

(ii)將吸附劑添加到所述溶液，由此通過吸附去除雜質；和

(iii)通過溶劑/去污劑(S/D)處理使包含在所述糊狀物中的病毒失活。

5.根據權利要求4所述的方法，其中，步驟(i)中的所述低溫糊狀物使用所述溶解緩沖液以1:2至1:6的體積比溶解。

6.根據權利要求4所述的方法，其中，步驟(i)中的所述溶解緩沖液為包含20mM檸檬酸鈉、100mM NaCl和100mM甘氨酸的緩沖液。

7.根據權利要求4所述的方法，其中，步驟(ii)中使用的所述吸附劑是氫氧化鋁(Al(OH)₃)。

8.根據權利要求7所述的方法，其中，基于所述糊狀物的重量，以0.05至0.5wt％的量使用所述氫氧化鋁。

9.根據權利要求4所述的方法，其中，步驟(iii)的所述溶劑/去污劑處理使用包含非離子去污劑和磷酸三正丁酯(TNBP)的溶劑/去污劑溶液進行。

10.根據權利要求9所述的方法，其中，所述非離子去污劑為選自下組的至少一個：聚山梨醇酯80(Tween 80)、聚山梨醇酯20(Tween 20)、Triton X-100和Triton X-45。

11.根據權利要求1所述的方法，其在步驟(c)和(d)之間進一步包括步驟(c’)：使在步驟(c)中回收的沉淀物溶解于溶解緩沖液中以獲得溶液，通過向其中添加甘氨酸使甘氨酸濃度與步驟(a)的甘氨酸濃度相同而使所述溶液沉淀，以獲得沉淀物。

12.根據權利要求1所述的方法，其在步驟(d)的納米過濾后進一步包括選自(e)超濾/滲濾(UF/DF)步驟和(f)配制步驟中的至少一個步驟。