[發明專利]標記復合物及其制備方法、試劑盒、應用和檢測系統

有效

• 申請號: 201780003894.1
• 申請日: 2017-01-20
• 公開（公告）號: CN108700584B
• 公開（公告）日: 2021-11-30
• 發明（設計）人: 饒微;方中剛;袁錦云;王燕梅;李婷華;王小莉
• 申請（專利權）人: 深圳市新產業生物醫學工程股份有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/576;G01N33/531
• 代理公司: 北京康信知識產權代理有限責任公司 11240
• 代理人: 韓建偉;金田蘊

本發明公開了一種標記復合物、其制備方法、包含所述標記復合物的試劑盒及應用和包括該試劑盒的檢測系統。其中，所述標記復合物包括：抗原；標記蛋白，與抗原偶聯形成標記復合物中間品；以及信號生成物，與標記復合物中間品偶聯形成標記復合物。

技術領域

本發明涉及體外診斷試劑領域，具體而言，涉及一種標記復合物、其制備方法、包含其的試劑盒及應用和包括該試劑盒的檢測系統。

背景技術

目前，臨床上涉及免疫檢測的方法主要包括酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、蛋白印跡試驗(WB)、免疫膠體金技術(GICT)、放射免疫沉淀試驗(RIPA)、化學發光法(CLIA)等。ELISA和CLIA適用于臨床上的大規模的初篩，但由于試劑組份的不穩定或者性能不足，導致檢測結果出現假陽性和假陰性。因此，進一步提高試劑的靈敏度和穩定性是十分必要的。

ELISA法是目前臨床血液篩查中普遍使用檢測技術，但是相對于CLIA全自動操作及高靈敏度的優勢，ELISA試驗操作程序相對復雜，且出現假陽性或假陰性的概率較高。近幾年國內外出現了以膠體金或乳膠顆粒為代表的快速檢測試紙條，但是由于結果是肉眼目視觀察，容易受觀察者主觀判斷的影響，靈敏度低，結果準確度也不高。

免疫印跡法(WB)是目前臨床檢測的確認方法之一，結果準確可靠，但是其技術難度大，目前全世界也只有屈指可數的幾家公司可以生產，高昂的使用成本使得它目前僅用于可疑標本的確認，而很少用于篩選。

化學發光分析法具有靈敏度高，線性范圍寬，特異性好，儀器設備操作簡單等優點，已成功應用于生命科學、食品科學、臨床醫學以及環境檢測等領域，成為現代分析領域中一種有效的微量及痕量分析技術。用于化學發光反應的發光物質根據發光機理主要有以下幾種：魯米諾及其衍生物、光澤精(Lucigenin)、過氧草酸酯(Peroxyoxalate)等。魯米諾的衍生物主要有異魯米諾、4-氨基己基-N-乙基異魯米諾等，魯米諾在堿性條件下可被一些氧化劑氧化發生化學發光反應，輻射出最大發射波長為425nm的化學發光。光澤精(N,N-二甲基二吖啶硝酸鹽，Lucigenin)自身在堿性環境中產生微弱的化學發光，加入過氧化氫時化學發光強度會大大增加，被氧化而發出420-500nm的光，具有較高的發光效率。過氧草酸酯(peroxalate)的化學發光反應涉及過氧化氫與芳基草酸酯之間的反應，是最有效的非生物化學發光反應。魯米諾類和吖啶酯類化學發光試劑是最常用的化學發光標記試劑；常用的酶標記物有辣根過氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶(ALP)，它們有各自的發光底物；而在實際應用中的電化學發光體系主要是釕聯吡啶[Ru(bpy)3]2+體系。

目前，在免疫檢測中以雙抗原(雙抗體)夾心法的應用較為廣泛。雙抗原(雙抗體)夾心法原理是：在固相材料上包被第一抗原(抗體)，加入待檢樣本，加入有標記物的第二抗原(抗體)進行檢測。如果待檢樣本中含有待檢測物，則形成“包被抗原(抗體)-抗體(抗原)-標記抗原(抗體)”的三明治結構，通過檢測標記物的信號來判定結果。應用雙抗原夾心法的關鍵之一在于標記抗原的質量，標記抗原的活性對免疫檢測的靈敏度以及穩定性有著決定性的影響。而高活性的標記抗原需要具備兩個條件：其一是標記抗原中單位抗原上結合的標記物要盡可能多；其二是標記過程對抗原的免疫學活性損失盡量小。很多抗原在和標記物偶聯之后，標記抗原的活性會有很大損失。通常的解決方法就是在抗原上融合表達一段融合蛋白，形成融合蛋白-抗原的嵌合抗原的表達形式，使用該方法表達出來的重組抗原在可溶性和表達量方面均有更好的表現，從而具備優良的標記性能。但是融合蛋白的運用存在一定程度的不足，例如用原核表達系統往往存在包涵體，導致標記抗原后有假陽性較高的影響。

公開號為CN1888901A的中國專利中提出的采用磁分離直接化學發光試劑及其測試方法，采用異魯米諾衍生物作為發光標記物，異魯米諾發光標記物的單克隆抗體時通過將異魯米諾發光標記物與二氯硫化碳或N-羥基琥珀酸聯接后再與單克隆抗體聯接。該專利未涉及針對重組抗原通過二次標記提高發光標記物的穩定性和靈敏度。