[發明專利]標記復合物及其制備方法、試劑盒、應用和檢測系統

有效

• 申請號: 201780003894.1
• 申請日: 2017-01-20
• 公開（公告）號: CN108700584B
• 公開（公告）日: 2021-11-30
• 發明（設計）人: 饒微;方中剛;袁錦云;王燕梅;李婷華;王小莉
• 申請（專利權）人: 深圳市新產業生物醫學工程股份有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/576;G01N33/531
• 代理公司: 北京康信知識產權代理有限責任公司 11240
• 代理人: 韓建偉;金田蘊

1.一種標記復合物，其特征在于，包括：

抗原，所述抗原包含蛋白質；

標記蛋白，與所述抗原偶聯形成標記復合物中間品，所述標記蛋白為辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、葡萄糖氧化酶或β-半乳糖苷酶；以及

信號生成物，與所述標記復合物中間品偶聯形成所述標記復合物；

所述標記蛋白和所述信號生成物為不同的物質。

2.根據權利要求1所述的標記復合物，其特征在于，所述抗原為重組抗原或天然抗原。

3.根據權利要求2所述的標記復合物，其特征在于，所述抗原為HIV-1重組抗原、HIV-2重組抗原、甲型肝炎病毒抗原、乙型肝炎病毒抗原、丙型肝炎病毒抗原、丁型肝炎病毒抗原、戊型肝炎病毒抗原、庚型肝炎病毒抗原、人類T淋巴細胞病毒抗原、梅毒螺旋體抗原、幽門螺旋桿菌抗原或人乳頭瘤病毒抗原。

4.根據權利要求3所述的標記復合物，其特征在于，所述抗原為HIV-1重組抗原或HIV-2重組抗原。

5.根據權利要求1至4中任一項所述的標記復合物，其特征在于，所述信號生成物為魯米諾、異魯米諾及異魯米諾衍生物、堿性磷酸酶、辣根過氧化物酶、熒光物質、稀土離子及其螯合物配基、吖啶酯及其衍生物或三聯吡啶釕。

6.根據權利要求5所述的標記復合物，其特征在于，所述異魯米諾衍生物為N-(4-氨丁基)-N-乙基異魯米諾。

7.一種如權利要求1至6中任一項所述的標記復合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

將表面帶有功能基團的標記蛋白與抗原進行偶聯反應，得到標記復合物中間品，所述標記蛋白為辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、葡萄糖氧化酶或β-半乳糖苷酶；

將信號生成物與所述標記復合物中間品進行偶聯反應，得到所述標記復合物；

所述標記蛋白和所述信號生成物為不同的物質。

8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述偶聯反應采用的方法為混合酸酐法、碳二亞胺法、戊二醛法、戊二酸酐法、重氮化法、琥珀酸酐法、羰基二咪唑法或過碘酸鈉法。

9.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述偶聯反應中用到的交聯劑為基于NHS-酯和亞氨酸酯反應性基團的同型雙功能氨基反應性蛋白交聯劑、基于馬來酰亞胺和酰肼反應基團的巰基-糖類交聯劑、基于馬來酰亞胺或吡啶二巰基反應基團的同型雙功能交聯劑、適用于蛋白和其他分子的伯胺和巰基基團之間的連接的異型雙功能蛋白交聯劑、適用于羧基與伯胺連接的碳二亞胺交聯劑、光反應性交聯劑中的異型雙功能交聯劑、化學選擇性連接交聯劑或雙功能交聯劑。

10.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述標記蛋白與所述抗原進行偶聯反應時，所述標記蛋白和所述抗原的摩爾比為1:1-3:1。

11.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述偶聯反應中用到的緩沖液為pH為4.0-6.5的PBS緩沖液、pH為8.0-9.8的碳酸鹽緩沖液、pH為7.0-8.0的0.5%-5%的戊二醛溶液或pH為4.0-6.0的MES緩沖液。

12.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述標記復合物中間品或所述標記復合物制備完成后放入儲存液中保存，所述儲存液包括：0.2-0.5 g/L磷酸二氫鉀、3.0-6.0g/L磷酸氫二鈉、4.0-8.0 g/L氯化鈉、0.5-1.5 g/L BSA，0.25-0.5 g/L疊氮鈉和0.25-0.5mL/L吐溫-20。

13.一種檢測試劑盒，其特征在于，包括如權利要求1至6中任一項所述的標記復合物或權利要求7至12中任一項所述制備方法制備得到的標記復合物。