[發明專利]制備頰上皮細胞懸液的方法及其用途

在審

• 申請號: 201780003463.5
• 申請日: 2017-11-10
• 公開（公告）號: CN109477067A
• 公開（公告）日: 2019-03-15
• 發明（設計）人: 薩特耶·賽格哈維;維納亞克·柯達格;查魯爾·柏漢吉
• 申請（專利權）人: 再生生物科學私人有限公司
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00;A61K35/38;A61K35/12;A61K35/00;A61D7/00
• 代理公司: 北京東方億思知識產權代理有限責任公司 11258
• 代理人: 肖善強

本發明涉及制備頰上皮細胞懸液以及在膀胱鏡下將所述頰上皮細胞懸液植入成人尿道缺陷部位的方法。

本發明涉及制備頰上皮細胞懸液以及在膀胱鏡下將所述頰上皮細胞懸液植入成人尿道缺陷部位的方法。

發明背景

美國專利公開號2010/0184220(頒發給M/s.The Technische UniveristyDresden)要求保護一種用于重建人或動物器官的組織移植構建體，該構建體包含生物相容性無細胞的膜和微血管膀胱內皮細胞。然而，本發明包括沒有任何膜或支架的頰粘膜上皮細胞。

European Urology(《歐洲泌尿學》)53(2008)1263-1271在標題為“Tissue-Engineered Buccal Mucosa Urethroplasty-Clinical Outcomes”(組織工程頰粘膜尿道成形術-臨床結果)的文章中公開了使用自體組織工程頰粘膜來治療尿道狹窄，該頰粘膜包括接種在DED(去上皮的真皮)的乳頭表面上的角質形成細胞和成纖維細胞。然而，本發明包括不在DED上接種的自體頰上皮細胞懸液。

European Urology Supplement(《歐洲泌尿學增刊》)2014:13:eV60在標題為“Reconstruction of extended urethral stricture with tissue engineeredautologous buccal mucosal graft(Mukocell)”(用組織工程自體頰粘膜移植物(Mukocell)重建延長的尿道狹窄)的文章中公開了在膠原支架表面上擴增和培養5X 5mm口腔粘膜移植物，其在三周后作為覆蓋物植入。將細胞接種在膠原膜上增殖(傳代數P1)。通常，每cm²≥1.X10⁵個細胞將嵌入移植物上。本發明不使用任何細胞接種的移植物，并且在植入前將自體頰上皮細胞懸液培養長達2周并與凝膠混合。

然而，本發明的方法具有更低的P0傳代數，與使用傳代數(P1)制備的細胞相比，P0傳代數可以不改變細胞的形態、生長速率和蛋白質表達。

發明目的

本發明的目的是一種制備頰上皮細胞懸液以修復成人尿道中的缺陷的方法。該方法使用少量的頰粘膜組織進行。

另一個目的是在采用或不采用生物相容性遞送系統(諸如纖維蛋白原和/或凝血酶和/或熱可逆凝膠化聚合物(TGP)凝膠和/或殼聚糖等的組合)的情況下在膀胱鏡下將頰上皮細胞懸液植入成人尿道的缺陷部位。

發明概述

一種制備頰上皮細胞懸液的方法，其包括：

(a)從受試者收獲頰粘膜組織；

(b)用化學解離劑(dissociation agent)處理來自(a)的組織；

(c)用營養基質洗滌來自(b)的組織樣品；

(d)將經洗滌組織的上皮與真皮分離；

(e)切碎、過濾以從上皮獲得均勻的上皮細胞懸液；

(f)任選地接種以使細胞增殖；

(g)用一種或多種酶收獲細胞單層；

(h)離心，棄去上清液；

(i)與營養基質混合；

(j)分析頰上皮細胞懸液；

(k)將0.4ml的頰上皮細胞懸液填充到V形1ml小瓶中；以及

(l)任選地運送(transporting)至與(a)中相同的受試者。