[發明專利]制備頰上皮細胞懸液的方法及其用途

在審

• 申請號: 201780003463.5
• 申請日: 2017-11-10
• 公開（公告）號: CN109477067A
• 公開（公告）日: 2019-03-15
• 發明（設計）人: 薩特耶·賽格哈維;維納亞克·柯達格;查魯爾·柏漢吉
• 申請（專利權）人: 再生生物科學私人有限公司
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00;A61K35/38;A61K35/12;A61K35/00;A61D7/00
• 代理公司: 北京東方億思知識產權代理有限責任公司 11258
• 代理人: 肖善強

1.一種制備頰上皮細胞懸液的方法，其包括：

(a)從受試者收獲頰粘膜組織；

(b)用化學解離劑處理來自(a)的組織；

(c)用營養基質洗滌來自(b)的組織樣品；

(d)將經洗滌組織的上皮與真皮分離；

(e)切碎、過濾以從上皮獲得均勻的上皮細胞懸液；

(f)任選地接種以使細胞增殖；

(g)用一種或多種酶收獲細胞單層；

(h)離心，棄去上清液；

(i)與營養基質混合；

(j)分析頰上皮細胞懸液；

(k)將0.4ml的頰上皮細胞懸液填充到V形1ml小瓶中；以及

(l)任選地運送至與(a)中相同的受試者。

2.根據權利要求1所述的制備頰上皮細胞懸液的方法，其中所述受試者是成人受試者。

3.根據權利要求1所述的制備頰上皮細胞懸液的方法，其還包括任選地與凝膠混合，同時在膀胱鏡下將所述頰上皮細胞懸液植入所述受試者的尿道的缺陷部位；其中所述凝膠選自生物相容性遞送系統，諸如纖維蛋白原和/或凝血酶和/或熱可逆凝膠化聚合物(TGP)凝膠和/或殼聚糖等的組合。

4.根據權利要求1所述的制備頰上皮細胞懸液的方法，其中所述化學解離劑選自胰蛋白酶、分散酶、膠原酶、胰蛋白酶-EDTA、鏈霉蛋白酶、透明質酸酶、彈性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰酶。

5.根據權利要求1所述的制備頰上皮細胞懸液的方法，其中所述營養基質選自含有所需生長因子的DMEM、EMEM、F12、IMDM等。

6.根據權利要求1所述的制備頰上皮細胞懸液的方法，其中所述接種在T-25和/或T-75和/或T-150燒瓶等中進行。

7.根據權利要求1所述的制備頰上皮細胞懸液的方法，其中用于收獲的酶選自胰蛋白酶-EDTA、膠原酶等。

8.根據權利要求1所述的制備頰上皮細胞懸液的方法，其中進行的分析是外觀、無菌性、支原體、內毒素、細胞計數、細胞活力、細胞純度測試、細胞表征和核型分析。

9.根據權利要求1所述的制備頰上皮細胞懸液的方法，其中收獲的頰粘膜組織來自成人的內頰并且為約1×1.5cm²。

10.根據權利要求1所述的制備頰上皮細胞懸液的方法，其中所述運送在2至8攝氏度下進行。

11.一種在膀胱鏡下將頰上皮細胞懸液植入成人尿道的缺陷部位的方法，其包括：

(a)從成人的內頰收獲人頰粘膜組織；

(b)使來自(a)的組織經受化學解離劑處理；

(c)用營養基質洗滌來自(b)的組織樣品；

(d)將經洗滌組織的上皮與真皮分離；

(e)切碎、過濾以從上皮獲得均勻的上皮細胞懸液；

(f)任選地接種以使細胞增殖；

(g)用一種或多種酶收獲細胞單層；

(h)離心，棄去上清液；

(i)與營養基質混合；

(j)分析頰上皮細胞細胞懸液；

(k)任選地將所述頰上皮細胞懸液填充到V形1ml小瓶中并運送；以及

(l)任選地與凝膠混合同時在膀胱鏡下將所述頰上皮細胞懸液植入成人尿道的缺陷部位。

12.根據權利要求11所述的在膀胱鏡下將頰上皮細胞懸液植入成人尿道的缺陷部位的方法，其中所述化學解離劑選自胰蛋白酶、分散酶、膠原酶、胰蛋白酶-EDTA、鏈霉蛋白酶、透明質酸酶、彈性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰酶。

13.根據權利要求11所述的在膀胱鏡下將頰上皮細胞懸液植入成人尿道的缺陷部位的方法，其中所述營養基質選自含有所需生長因子的DMEM、EMEM、F12、IMDM等。