[發(fā)明專利]一種低消旋雜質(zhì)利拉魯肽的合成方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201780001586.5
• 申請日: 2017-08-18
• 公開（公告）號: CN107960079B
• 公開（公告）日: 2021-02-19
• 發(fā)明（設計）人: 付玉清;馬洪季;李新宇;張利香;支欽;吳麗芬;劉自成
• 申請（專利權）人: 深圳市健元醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C07K14/605
• 分類號: C07K14/605;C07K1/04
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 許飛

一種低消旋雜質(zhì)利拉魯肽的合成方法，包括如下步驟：合成得到前肽，使用固相合成法在前肽上偶聯(lián)含有Thr?Phe的2～5肽；進一步固相合成得到利拉魯肽樹脂，經(jīng)側鏈修飾后裂解或直接裂解、純化、凍干，得到利拉魯肽。提供的利拉魯肽的合成方法有效抑制或減少了與產(chǎn)品性質(zhì)極為相似的消旋雜質(zhì)D?Thr⁵的產(chǎn)生，有利于利拉魯肽粗肽的純化，同時保證其較高的收率，大大降低了生產(chǎn)成本；在利拉魯肽合成過程中，二肽片段、三肽片段、四肽片段、五肽片段或其組合與Gly?樹脂的合成可同時進行，也縮短了一定的合成時間。

技術領域

本發(fā)明涉及一種多肽的合成方法，特別涉及一種低消旋雜質(zhì)利拉魯肽的合成方法。

背景技術

隨著社會的發(fā)展，世界范圍內(nèi)糖尿病的發(fā)病率呈明顯增加的趨勢，2000年曾估計為2.8％，到2025年預計為4.3％，糖尿病患者人數(shù)也將從2000年的1.71億增加到2025年的3.8億。糖尿病分為妊娠期糖尿病、特異性糖尿病、I型糖尿病和II型糖尿病。其中，II型糖尿病又名非胰島素依賴型糖尿病，特點是人體自身能夠產(chǎn)生胰島素，但細胞無法對其作出反應，使胰島素的效果大打折扣。針對II型糖尿病的降糖藥種類很多，包括二甲雙胍、磺脲類藥物和胰高血糖樣肽-1(GLP-1)的受體激動素等，GLP-1的受體激動素是近年來研究的熱點。

利拉魯肽，人胰高糖素樣肽-1(GLP-1)類似物中的一種，英文名為Liraglutide，是丹麥諾和諾德公司研制出的一種治療II型糖尿病的藥物，其注射劑分別于2010年1月25日獲得FDA批準上市(商品名為Victoza)、2011年3月4日獲得SFDA批準上市。利拉魯肽作為GLP-1受體激動劑能起到良好的降低血糖作用。

目前，利拉魯肽的合成，主要采用基因重組技術和逐步偶聯(lián)的方法。采用基因重組技術合成利拉魯肽時，技術難度較大，成本相對較高，中間體GLP-1(7-37)-OH需要HPLC反復純化，再在液相條件下與Nα-alkanoyl-Glu(ONSu)-OtBu反應，并且由于GLP-1(7-37)-OH N端未保護以及側鏈保護基全部脫除，會導致產(chǎn)生許多雜質(zhì)，難以純化。采用逐步偶聯(lián)的方法進行利拉魯肽合成時，本領域技術人員周知，以樹脂為固相載體，與Fmoc-Gly-OH縮合反應獲得Fmoc-Gly-樹脂；通過固相合成法，按照利拉魯肽主鏈肽序依次縮合具有N端Fmoc保護且側鏈保護的氨基酸，其中賴氨酸采用Fmoc-Lys(X)-OH(X為Lys側鏈保護基團)或Fmoc-Lys(N-ε-(N-α-Palmitoyl-L-γ-glutamyl))-OH，每次縮合反應30-35min；利拉魯肽樹脂賴氨酸側鏈經(jīng)修飾后裂解或直接裂解；純化，凍干得到利拉魯肽。由于利拉魯肽的序列較長且有較多的疏水氨基酸，逐步偶聯(lián)時易形成β折疊，導致樹脂收縮嚴重，延長反應時間，進而粗肽中產(chǎn)生較多與產(chǎn)品性質(zhì)極為接近的消旋雜質(zhì)NH₂-His-Ala-Glu-Gly-D-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys(N-ε-(N-α-Palmitoyl-L-γ-glutamyl))-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-COOH(D-Thr⁵利拉魯肽)，純化比較困難；同時樹脂收縮嚴重，反應不完全，導致收率偏低。

一方面，消旋體副產(chǎn)物在結構上與利拉魯肽非常接近，使得利拉魯肽粗肽的純化分離十分困難，使用多種純化分離體系嘗試皆不能達到良好的分離效果。如果進行多次分離，則可以預見分離會導致產(chǎn)品的顯著損失；另一方面，消旋雜質(zhì)的存在，對藥品質(zhì)量有著不利影響，不僅影響藥物的穩(wěn)定性和療效，甚至對人體健康有害。因此，在合成利拉魯肽的制造工藝中，應當盡可能地減少消旋體副產(chǎn)物的產(chǎn)生。