[發明專利]一種用于動物組織總RNA提取的方法在審
| 申請號： | 201711496653.3 | 申請日： | 2017-12-31 |
| 公開（公告）號： | CN107904233A | 公開（公告）日： | 2018-04-13 |
| 發明（設計）人： | 李輝;易恒潔;師新彩;趙忠海;李興才;楊華婷;陳林;彭邦星;卜小雁 | 申請（專利權）人： | 貴州大學 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 貴陽中新專利商標事務所52100 | 代理人： | 李亮,程新敏 |
| 地址： | 550025 貴州省貴*** | 國省代碼： | 貴州;52 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 用于 動物 組織 rna 提取 方法 | ||
1.一種用于動物組織總RNA提取的方法，其特征在于：包括如下步驟：
1)樣品采集：在干凈的環境中采集動物組織，控制動物組織在空氣中的暴露時間在1-2min以內，將所采集的組織樣品裝入離心管中，迅速將裝有組織樣品的離心管投入液氮中速凍，以減少總RNA的降解和降低細胞內酶的活性；樣品在-80℃下保存；
2)打開超凈工作臺，用酒精對超凈工作臺進行消毒，將滅菌后的研缽、剪刀、鑷子，試劑，普通滅菌離心管、無RNA酶或普通滅菌移液槍頭、微量移液槍及乳膠手套一起放入超凈工作臺，關閉日光燈，打開紫外燈，照射30min，通風10min；
3)分別取30-50mg冷凍保存組織于研缽中，加入液氮將組織充分研磨至粉末，每個樣品研磨時間不超過4min，研磨過程中必須保持有液氮；
4)將研磨好的樣品加入已裝有1mL Trizol試劑的離心管中，在2000-2800r/min振蕩混勻，冰上放置5-10min，使得核酸與蛋白完全分離；
5)加入0.22mL氯仿，漩渦振蕩15s或上下顛倒搖晃1min，冰上放置3min，在4℃離心機12000×g離心15min。
6)離心完成的溶液分為三層，上層為水相層，中間為白色雜質層，下層為粉紅色有機層；懸空吸取上層水相層轉移至干凈的離心管中，分別加入600μL異丙醇、600μL氯化鈉和檸檬酸鈉混合液，輕柔上下顛倒混勻，冰上放置10min或-20℃放置20min；
7)12000×g 4℃離心10min，棄上清；
8)加入1.2mL質量百分比為75％乙醇洗滌沉淀，輕柔上下顛倒，使白色沉淀懸浮；12000×g 4℃離心3min，棄上清；
9)重復采用1.2mL質量百分比為75％乙醇洗滌沉淀，輕柔上下顛倒，使白色沉淀懸浮，置于冰上靜置5min，7500×g 4℃離心5min，棄上清；
10)7500×g 4℃離心30s，用移液槍頭吸掉多余液體，室溫干燥3-5min；
11)加入30-50μL RNase-free H2O或DEPC處理水，55-60℃水浴2min，充分溶解RNA，立即冰浴2min，4000×g 4℃離心10-15s，將所得到的RNA溶液置于-80℃保存。
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