[發明專利]一種用于動物組織總RNA提取的方法

在審

• 申請號: 201711496653.3
• 申請日: 2017-12-31
• 公開（公告）號: CN107904233A
• 公開（公告）日: 2018-04-13
• 發明（設計）人: 李輝;易恒潔;師新彩;趙忠海;李興才;楊華婷;陳林;彭邦星;卜小雁
• 申請（專利權）人: 貴州大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 貴陽中新專利商標事務所52100
• 代理人: 李亮,程新敏

技術領域

本發明涉及生命科學技術和自然科學技術領域，尤其是一種用于動物組織總RNA提取的方法。

背景技術

隨著現代分子生物學技術的飛速發展，對于RNA的研究已成為目前的研究熱點之一，但是由于RNA與DNA分子不一樣，它一般為單鏈結構，不形成雙螺旋結構，因此它的穩定性較差，極易發生降解現象，直接影響后續實驗結果。

目前，雖然市場上有眾多的總RNA提取試劑(試劑盒)，且根據說明書描述均能獲得很好的效果，但是在實際操作過程中，由于受到實驗操作環境、實驗室條件和實驗操作手法等諸多因素的影響，往往很難獲得理想效果，特別對于實驗新手來說更是一個極大的難題。為了獲得高質量的總RNA就需要大量的重復實驗或者委托第三方進行提取；此外，通常情況下RNA的提取工作都需要在嚴格的無菌、無酶環境中進行，所用到的實驗耗材也需要進行無RNA酶處理，這無形中也就增加了實驗成本，因此，尋找一種高效、經濟的總RNA提取方法顯得尤為必要。

發明內容

本發明的目的是：提供一種用于動物(畜禽)組織總RNA提取的方法，它操作簡單，無需純化也能獲得較好結果，所得總RNA根據后續實驗要求可直接用于分子試驗，顯著降低了總RNA提取成本。

本發明是這樣實現的：一種用于動物(畜禽)組織總RNA提取的方法，包括如下步驟：

1)樣品采集：在干凈的環境中采集動物組織，控制動物組織在空氣中的暴露時間在1-2min以內，將所采集的組織樣品裝入離心管中，迅速將裝有組織樣品的離心管投入液氮中速凍，以減少總RNA的降解和降低細胞內酶的活性；樣品在-80℃下保存；

2)打開超凈工作臺，用酒精對超凈工作臺進行消毒，將滅菌后的研缽、剪刀、鑷子，試劑，普通滅菌離心管、無RNA酶或普通滅菌移液槍頭、微量移液槍及乳膠手套一起放入超凈工作臺，關閉日光燈，打開紫外燈，照射30min，通風10min；

3)分別取30-50mg冷凍保存組織于研缽中，加入液氮將組織充分研磨至粉末，每個樣品研磨時間不超過4min，研磨過程中必須保持有液氮；

4)將研磨好的樣品加入已裝有1mL Trizol試劑的離心管中，在2000-2800r/min振蕩混勻，冰上放置5-10min，使得核酸與蛋白完全分離；

5)加入0.22mL氯仿，漩渦振蕩15s或上下顛倒搖晃1min，冰上放置3min，在4℃離心機12000×g離心15min。

6)離心完成的溶液分為三層，上層為水相層，中間為白色雜質層，下層為粉紅色有機層；懸空吸取上層水相層轉移至干凈的離心管中，分別加入600μL異丙醇、600μL氯化鈉和檸檬酸鈉混合液，輕柔上下顛倒混勻，冰上放置10min或-20℃放置20min；

7)12000×g 4℃離心10min，棄上清；

8)加入1.2mL質量百分比為75％乙醇洗滌沉淀，輕柔上下顛倒，使白色沉淀懸浮；12000×g 4℃離心3min，棄上清；

9)重復采用1.2mL質量百分比為75％乙醇洗滌沉淀，輕柔上下顛倒，使白色沉淀懸浮，置于冰上靜置5min，7500×g 4℃離心5min，棄上清；

10)7500×g 4℃離心30s，用移液槍頭吸掉多余液體，室溫干燥3-5min；

11)加入30-50μL RNase-free H₂O或DEPC處理水，55-60℃水浴2min，充分溶解RNA，立即冰浴2min，4000×g 4℃離心10-15s，將所得到的RNA溶液置于-80℃保存。

本發明的它操作簡單，無需純化也能獲得較好結果，所得總RNA根據后續實驗要求可直接用于分子試驗，顯著降低了總RNA提取成本。本發明適用于任何畜禽品種，其提取效率高效、方便快捷、減少去RNA酶離心管和移液槍頭的使用量，有效降低經濟成本，也減少了實驗耗材的去RNA酶的處理步驟，尤其對于實驗環境條件較差或實驗新手而言尤為有用。

附圖說明

附圖1為本發明的總RNA瓊脂糖凝膠電泳檢測圖；

具體實施方式

提取動物組織總RNA的方法，包括如下步驟：

1、實驗樣品采集

采取興義鴨新鮮肌肉組織與1.5mL離心管中，投入到液氮中進行速凍，帶回實驗室保存于-80℃超低溫冰箱備用；

2、具體操作步驟