[發(fā)明專利]一種匹多莫德的合成方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201711493143.0
• 申請日: 2017-12-30
• 公開（公告）號: CN108165594A
• 公開（公告）日: 2018-06-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 徐峰;周金玉;伏帥;蘇軍;柳鐸芳;孫美祿
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇諾泰澳賽諾生物制藥股份有限公司
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02;C07K5/078;C07K1/14
• 代理公司: 連云港潤知專利代理事務(wù)所 32255
• 代理人: 劉喜蓮

1.一種匹多莫德的合成方法，其特征在于：該方法采用了羧基R基團(tuán)保護(hù)的L-噻唑烷-4-羧酸酯或L-噻唑烷-4-羧酸與氮R1 保護(hù)的焦谷氨酸在酶催化劑下，縮合形成通式III 所示的目標(biāo)化合物匹多莫德：

III

所述的R選自:H 、OtBu、Bn、cHX、Mpe、2-phlpr 、TEGbn、Damb、Al 、pNB、pTMSE或者Dmnb；

所述的R1 選自:H 、Z 、Boc、Cl-Z、Fmoc、oNBS、dNBS、Troc、Dts、pNZ、oNZ、NVOC、NPPOC、HFA 、Ddz、Bpoc、Nps、Nsc、Bsmoc、α-Nsmoc、ivDde、Fmoc* 、MTT或者Alloc。

2.根據(jù)權(quán)利要求1 所述的一種匹多莫德的合成方法，其特征在于：所述的取代苯環(huán)選自3位氟取代、3 ， 5位氟取代、3位氯取代、三氟甲基取代苯環(huán)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1 或2所述的二種匹多莫德的合成方法，其特征在于，其具體步驟如下：

(1)將氮R1 保護(hù)的焦谷氨酸、酶、緩沖溶液一起攪拌均勻；所述的緩沖溶液優(yōu)選磷酸鉀；

(2) 加入羧基R基團(tuán)保護(hù)的L-噻唑烷-4-羧酸酯或L-噻唑烷-4-羧酸，繼續(xù)攪拌反應(yīng)；

(3) 反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)液濾去酶得濾液；

(4) 當(dāng)原料使用羧基R基團(tuán)保護(hù)的L-噻唑烷-4-羧酸、氮無保護(hù)的焦谷氨酸時，濾液用氫氧化鈉或者氫氧化鉀溶液水解，然后用酸直接調(diào)酸至大量白色沉淀，過濾得到匹多莫德粗品；

當(dāng)原料使用羧基R基團(tuán)保護(hù)的L-噻唑烷-4-羧酸酯、除H外的氮R1 保護(hù)的焦谷氨酸時，濾液經(jīng)酸洗、堿洗或堿性鹽洗滌、飽和氯化鈉溶液洗滌，旋蒸得到固體后，脫除R1 保護(hù)基，然后用氫氧化鈉或者氫氧化鉀溶液水解，去R基團(tuán)，用酸直接調(diào)酸至大量白色沉淀，過濾得到匹多莫德粗品。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種匹多莫德的合成方法，其特征在于：原料氮R1 保護(hù)的焦谷氨酸、羧基R基團(tuán)保護(hù)的L-噻唑烷-4-羧酸酯或L-噻唑烷-4-羧酸、酶的質(zhì)量比為0.8~1.5:1:0.01~0.05 ，優(yōu)選1. 1:1:0.03 。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種匹多莫德的合成方法，其特征在于：緩沖溶液的體積ml與氮R1 保護(hù)的焦谷氨酸的量mmol之比為1~20: 1，優(yōu)選7: 1；加入羧基R基團(tuán)保護(hù)的L-噻唑烷-4-羧酸酯之后，在室溫下攪拌反應(yīng)，優(yōu)選在室溫下攪拌反應(yīng)24小時。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種匹多莫德的合成方法，其特征在于，步驟(3) 中：反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液用硅藻土或者硅藻土或砂芯漏斗濾去酶，過濾后用有機(jī)溶劑淋洗硅藻土，合并有機(jī)溶劑得濾液。

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種匹多莫德的合成方法，其特征在于，步驟(3) 中：濾液依次用稀鹽酸洗滌、碳酸氫鈉洗滌、飽和氧化納溶液洗滌，洗滌完畢的有機(jī)溶劑溶液用無水硫酸鈉干燥，旋蒸得到固體粗產(chǎn)品。

8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種匹多莫德的合成方法，其特征在于，步驟(4) 中：脫除R1保護(hù)基時，根據(jù)R1 的不同，選擇合適的脫保護(hù)試劑脫除，所述的脫保護(hù)試劑選自有機(jī)堿、無機(jī)堿、有機(jī)酸、無機(jī)酸，再用醚類優(yōu)選乙醚、石油醚、異丙醚洗滌后得到固體產(chǎn)品：脫除R基團(tuán)時，根據(jù)R的不同，選擇不同的脫保護(hù)試劑脫除，所述的脫保護(hù)試劑選自無機(jī)堿、有機(jī)酸、無機(jī)酸，酸化后得到匹多莫德粗品：酸化操作優(yōu)選濃鹽酸。

9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種匹多莫德的合成方法，其特征在于，步驟(4) 中：粗產(chǎn)品用純水進(jìn)行重結(jié)晶，獲得高純匹多莫德產(chǎn)品。

10.根據(jù)權(quán)利要求1 所述的一種匹多莫德的合成方法，其特征在于，所述的酶為蛋白酶，在匹多莫德的合成過程中用作催化劑，所述的蛋白酶優(yōu)選來源于枯草桿菌、南極假絲酵母（Candida Antarctica）、芽孢桿菌；所述的蛋白酶優(yōu)選為包涵體，無需純化。