[發(fā)明專利]一種用于純化蛋白的表達(dá)載體

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711489413.0
• 申請(qǐng)日: 2017-12-30
• 公開（公告）號(hào): CN108218997B
• 公開（公告）日: 2020-12-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王天澤;郝淑靜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京中科唯新生物醫(yī)學(xué)研究所有限公司
• 主分類號(hào): C07K19/00
• 分類號(hào): C07K19/00;C07K1/14;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 北京展翅星辰知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11693
• 代理人: 魏威

本發(fā)明提供了一種用于純化蛋白的表達(dá)載體，上述表達(dá)載體包括S100蛋白家族基因編碼序列以及其他載體元件，上述S100蛋白家族基因編碼序列位于能夠正常表達(dá)的區(qū)域。本發(fā)明提供了一種用于純化蛋白的表達(dá)載體，以至少解決現(xiàn)有技術(shù)中用于純化蛋白的表達(dá)載體操作復(fù)雜成本高的技術(shù)問題，本發(fā)明提出的新的純化蛋白的表達(dá)載體，操作方便，成本低，純化效果好。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，更具體地，涉及一種用于純化蛋白的表達(dá)載體。

背景技術(shù)

對(duì)于純化分子量小于60千道爾頓(kDa)的蛋白，現(xiàn)有技術(shù)采用的方法是電泳、離子交換、蛋白沉淀、親和層析等，但這些純化方法單一使用各有缺陷，比如蛋白沉淀純化效果差；電泳的分離效果好，但制備量太低，不適用于大規(guī)模制備；離子交換：即便是用最精確控制的條件，僅用離子交換單一的方法也得不到純的蛋白，還需要其他的純化步驟；親和層析：?jiǎn)慰狗浅０嘿F，而且也需先純化，單抗與目的蛋白結(jié)合力太強(qiáng).要用苛刻的條件來洗脫，這會(huì)使目的蛋白失活并破壞單抗，混合物中的其他蛋白如蛋白酶也可能破壞抗體或與它們非特異結(jié)合，某些單抗也會(huì)在純化過程中從樹脂上解離下來混入產(chǎn)物中，也需要從終產(chǎn)物中去除。即便是這些方法和其他方法配合使用，也很難得到純化度很高的蛋白，并且操作復(fù)雜，現(xiàn)有技術(shù)中純化蛋白較好的蛋白純化儀(AKTA)價(jià)格太昂貴，故有待提出一種新的用于純化蛋白的表達(dá)載體，以方便純化蛋白使用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種用于純化蛋白的表達(dá)載體，以至少解決現(xiàn)有技術(shù)中用于純化蛋白的表達(dá)載體操作復(fù)雜成本高的技術(shù)問題。

本發(fā)明提供了一種用于純化蛋白的表達(dá)載體，上述表達(dá)載體包括S100蛋白家族基因編碼序列以及其他載體元件，上述S100蛋白家族基因編碼序列位于能夠正常表達(dá)的區(qū)域。

可選的，上述其他載體元件包括多克隆位點(diǎn)、篩選標(biāo)記、操縱子、啟動(dòng)子以及終止子，上述多克隆位點(diǎn)區(qū)內(nèi)包括上述S100蛋白家族基因編碼序列。

可選的，上述表達(dá)載體是原核表達(dá)載體或真核表達(dá)載體。

可選的，上述S100蛋白家族基因編碼序列為S100A蛋白家族基因編碼序列、S100B蛋白家族基因編碼序列、S100C蛋白家族基因編碼序列、S100D蛋白家族基因編碼序列、S100E蛋白家族基因編碼序列、S100F蛋白家族基因編碼序列、S100P蛋白家族基因編碼序列、S100G蛋白家族基因編碼序列、S100L蛋白家族基因編碼序列或S100Z蛋白家族基因編碼序列。

可選的，上述S100A蛋白家族基因編碼序列為S100A1、S100A2、S100A3、S100A4、S100A5、S100A6、S100A7、S100A8、S100A9、S100A10、S100A11、S100A12、S100A13、S100A14、S100A15或S100A16。

一種制備任一上述的表達(dá)載體的方法，包括如下步驟：

1)合成上述S100蛋白家族基因編碼序列，上述S100蛋白家族基因編碼序列上游添加第一限制性內(nèi)切酶酶切割位點(diǎn)識(shí)別序列，上述S100蛋白家族基因編碼序列下游添加第二限制性內(nèi)切酶酶切割位點(diǎn)識(shí)別序列；

2)用上述第一限制性內(nèi)切酶與上述第二限制性內(nèi)切酶對(duì)上述S100蛋白家族基因編碼序列和第二表達(dá)載體進(jìn)行酶切反應(yīng)，得到酶切產(chǎn)物，上述第二表達(dá)載體包含上述其他載體元件；

3)將上述步驟2)的上述酶切產(chǎn)物進(jìn)行連接，得到連接產(chǎn)物；

4)將上述步驟3)的上述連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞，進(jìn)行培養(yǎng)，得培養(yǎng)產(chǎn)物；

5)對(duì)上述步驟4)中的上述培養(yǎng)產(chǎn)物進(jìn)行篩選鑒定；

6)將上述步驟5)中鑒定為陽性的上述培養(yǎng)產(chǎn)物進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，得擴(kuò)大培養(yǎng)產(chǎn)物；

7)收集上述步驟6)中含擴(kuò)大培養(yǎng)產(chǎn)物的液體，離心獲得沉淀；