[發明專利]一種菌渣中紅霉素殘留的檢測方法

有效

• 申請號: 201711488473.0
• 申請日: 2017-12-29
• 公開（公告）號: CN107907616B
• 公開（公告）日: 2020-10-27
• 發明（設計）人: 王義;張鵬;金昌福;李寧飛
• 申請（專利權）人: 寧夏希望田野生物農業科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/74
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 賈澤純

一種菌渣中紅霉素殘留的檢測方法，它涉及一種菌渣中紅霉素殘留效價的檢測方法，該方法包括對照品溶液的制備、供試品溶液的制備，之后采用高效液相色譜法以梯度洗脫的方式將上述標準品溶液和供試品溶液注入液相色譜儀中，根據外標法計算紅霉素效價。本發明通過對色譜條件的優選及供試品、標準品制備方法的試驗，建立了菌渣中紅霉素的液相色譜分析方法；通過對色譜分離系統的優化，建立了菌渣中紅霉素的檢測方法，通過方法學驗證試驗研究表明：所建立的方法準確度高、專屬性強、重現性良好，能有效檢測菌渣中紅霉素效價。

技術領域

本發明涉及菌渣的檢測檢驗技術領域，特別是涉及一種菌渣中紅霉素殘留效價的檢測方法。

背景技術

紅霉素(Erythromycin)是Mc Guire等人在1952年發現的，是由紅霉素鏈霉菌(Streptomyces erythraeus)產生的十四元大環內酯類抗生素的主要品種。紅霉素分為紅霉素A、B、C和D，其中紅霉素A具有抗菌活性，是紅霉素主要的活性成分。雖然紅霉素B的抗菌譜和抗菌活性與紅霉素A相似，但是紅霉素B的毒性比較大。紅霉素C不是活性物質，而且是我國生產的紅霉素的主要雜質。多年來世界各國的藥學工作者根據紅霉素酸縮酮化失效原理，對紅霉素的化學結構和抗菌活性進行了一系列的廣泛而又深入的研究，獲得了一大批具有藥代動力學新特性的紅霉素類大環內酯品種：羅紅霉素、阿奇霉素、克拉霉素、地紅霉素、氟紅霉素等衍生物。這些衍生物的出現使大環內酯類抗生素在抗感染藥物中所擁有的市場份額進一步擴大。

紅霉素菌渣是以淀粉、黃豆粉、玉米漿為主要原料，加入紅霉素菌種-紅色糖多霉菌經過好氧深層發酵生產紅霉素后產生的廢渣，除了含有大量的水分外，其主要成分為殘留淀粉及其他糖類、殘留黃豆粉，大量菌絲體、部分無機物以及少量的紅霉素殘留(在菌渣原液中的濃度約600-1400U/mL)。

紅霉素菌渣散發出一種特殊異味，而且，菌渣有機物含量高，如果不加以處置任意廢棄可引起二次發酵，顏色變黑，產生惡臭味，引來大量蒼蠅，環境十分惡劣。依據2008 年修訂后的《國家危險廢物名錄》，抗生素菌渣屬于化學藥品原料藥生產過程中的培養基廢物，須按危險廢物進行管理。抗生素菌渣含有殘留抗生素及代謝中間產物等，是一種特殊的危險廢物，如處置不當，會對生態環境以及人體健康產生潛在的危害，其危害具有隱蔽性、滯后性、累計性、協同性和連帶性等特點。

發明內容

針對目前國內外尚無菌渣紅霉素殘留標準檢測方法這一現狀，沒有一種有效解決基質效應的影響，且現有技術無法快速/準確檢測菌渣中紅霉素殘留量的問題，本發明建立一種菌渣中紅霉素殘留的檢測方法。

本發明的一種菌渣中紅霉素殘留的檢測方法，它是按照以下步驟進行的：

一、供試品樣品制備：

1)稱取含有紅霉素的菌渣，加入提取劑乙腈-Tris-CaCl₂溶液，渦旋振蕩45～60s，然后在超聲中輔助提取20～30min，再以3500～4000rpm離心5～10min，取上清液，收集沉淀；

2)向步驟1)收集的沉淀中加入提取劑乙腈-Tris-CaCl₂溶液，渦旋振蕩45～60s，然后在超聲中輔助提取20～30min，再以3500～4000rpm離心5～10min，取上清液；

3)合并步驟1)和步驟2)的上清液，置于35℃水浴旋轉蒸發至上清液體積的五分之一，得無機相；

4)向無機相中加入pH為4～7的Tris-CaCl₂復溶液，震蕩渦旋，待殘渣全部溶解后，調節至pH＝8～10，再加入分散劑甲醇，萃取劑1,2-二氯乙烷，渦旋30s，4000r/min離心5min，抽取下層液體；

5)向步驟4)下層液體中加入萃取劑1,2-二氯乙烷渦旋30～45s，4000r/min離心5min，抽取下層液體；

6)重復步驟1)至5)的操作，抽取下層液體；