[發明專利]一種菌渣中紅霉素殘留的檢測方法

有效

• 申請號: 201711488473.0
• 申請日: 2017-12-29
• 公開（公告）號: CN107907616B
• 公開（公告）日: 2020-10-27
• 發明（設計）人: 王義;張鵬;金昌福;李寧飛
• 申請（專利權）人: 寧夏希望田野生物農業科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/74
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 賈澤純

1.一種菌渣中紅霉素殘留的檢測方法，其特征在于它是按照以下步驟進行的：

一、供試品樣品制備：

1)稱取含有紅霉素的菌渣，加入提取劑乙腈-Tris-CaCl₂溶液，渦旋振蕩45～60s，然后在超聲中輔助提取20～30min，再以3500～4000rpm離心5～10min，取上清液，收集沉淀；

2)向步驟1)收集的沉淀中加入提取劑乙腈-Tris-CaCl₂溶液，渦旋振蕩45～60s，然后在超聲中輔助提取20～30min，再以3500～4000rpm離心5～10min，取上清液；

3)合并步驟1)和步驟2)的上清液，置于35℃水浴旋轉蒸發至上清液體積的五分之一，得無機相；

4)向無機相中加入pH為4～7的Tris-CaCl₂復溶液，震蕩渦旋，待殘渣全部溶解后，調節至pH＝8～10，再加入分散劑甲醇，萃取劑1,2-二氯乙烷，渦旋30s，4000r/min離心5min，抽取下層液體；

5)向步驟4)下層液體中加入萃取劑1,2-二氯乙烷渦旋30～45s，4000r/min離心5min，抽取下層液體；

6)重復步驟1)至5)的操作，抽取下層液體；

7)合并步驟5)和步驟6)的下層液體，用氮氣吹至近干后用甲醇復溶，將復溶液過0.45μm濾膜后，即得供試品樣品；

其中，紅霉素菌渣與提取劑乙腈-Tris-CaCl₂溶液的質量體積比為1g：12～17mL；沉淀與提取劑乙腈-Tris-CaCl₂溶液的質量體積比為1g：12～17mL；無機相與Tris-CaCl₂復溶液的體積比為4～8:10；無機相與分散劑甲醇的體積比為4～8:1；無機相與萃取劑1,2-二氯乙烷的體積比為4～8:1；

二、標準曲線繪制：

用甲醇將紅霉素標準貯備液稀釋成質量濃度為1.00mg/L、5.00mg/L、10.00mg/L、20.00mg/L、50.00mg/L、100.00mg/L、200.00mg/L、500.00mg/L和1000.00mg/L的標準工作溶液，采用高效液相色譜法對上述標準工作溶液進行檢測，以測得峰面積作為縱坐標，以標準工作溶液濃度作為橫坐標，繪制標準曲線，并求回歸方程和相關系數；

三、測定：吸取上述濃度為500.00mg/L的標準工作品溶液和供試品樣品，分別注入液相色譜儀中，根據外標法計算紅霉素殘留效價；即完成所述的菌渣中紅霉素殘留的檢測方法；

色譜條件：色譜柱：色譜柱為Waters-C18柱，色譜柱內徑為4.6mm，柱長250mm，填料顆粒直徑為5μm，流動相：乙腈-0.01moL/L磷酸氫二鉀溶液體系等度洗脫，檢測波長：215nm，流速：1mL/min，柱溫：20～35℃；菌渣中紅霉素的殘留量為500～1000mg/kg。

2.根據權利要求1所述的一種菌渣中紅霉素殘留的檢測方法，其特征在于磷酸氫二鉀溶液的pH＝8～10。

3.根據權利要求1所述的一種菌渣中紅霉素殘留的檢測方法，其特征在于該方法最低定性檢出限為0.0660mg/Kg，定量檢出限為0.2210mg/Kg。

4.根據權利要求1所述的一種菌渣中紅霉素殘留的檢測方法，其特征在于步驟4)中調pH值是采用氨水進行的。

5.根據權利要求1所述的一種菌渣中紅霉素殘留的檢測方法，其特征在于紅霉素菌渣與提取劑乙腈-Tris-CaCl₂溶液的質量體積比為1g：15mL。

6.根據權利要求1所述的一種菌渣中紅霉素殘留的檢測方法，其特征在于沉淀與提取劑乙腈-Tris-CaCl₂溶液的質量體積比為1g：15mL。

7.根據權利要求1所述的一種菌渣中紅霉素殘留的檢測方法，其特征在于無機相與Tris-CaCl₂復溶液的體積比為6:10。