[發明專利]一種嵌合抗原受體基因修飾的T淋巴細胞的制備方法、制得的CAR-T細胞及其用途在審
| 申請號： | 201711487885.2 | 申請日： | 2017-12-29 |
| 公開（公告）號： | CN108085342A | 公開（公告）日： | 2018-05-29 |
| 發明（設計）人： | 姜舒;張蕓;紀惜鑾;鄭思建;楊順;羅朝霞 | 申請（專利權）人： | 深圳市茵冠生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/867 | 分類號： | C12N15/867;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00 |
| 代理公司： | 深圳市博銳專利事務所 44275 | 代理人： | 張明 |
| 地址： | 518000 廣東省深圳市南山區西麗*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 嵌合抗原 受體基因 修飾 制備 重組慢病毒 感染 細胞 攜帶 應用 | ||
1.一種嵌合抗原受體基因修飾的T淋巴細胞的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：
S1、將分離得到的CD4+T細胞與CD8+T細胞激活；
S2、用攜帶EGFR-CAR的重組慢病毒感染上述步驟S1處理后的CD4+T細胞和CD8+T細胞，將感染處理后得到的EGFR-CAR CD4+T細胞和EGFR-CARCD8+T細胞共同培養，以促進EGFR-CAR CD8+T細胞增殖。
2.根據權利要求1所述的制備CAR-T細胞的方法，其特征在于：所述步驟S1中的激活步驟的具體操作為：向分離得到的CD4+T細胞和CD8+T細胞添加CD3/CD28抗體偶聯磁珠。
3.根據權利要求2所述的制備CAR-T細胞的方法，其特征在于：所述CD3/CD28抗體偶聯磁珠與T細胞的比例為1:1～3:1。
4.根據權利要求1所述的制備CAR-T細胞的方法，其特征在于：所述步驟S2還包括向EGFR-CAR CD4+T細胞和EGFR-CAR CD8+T細胞共培養體系添加重組人IL-2、IL-7和IL-15進行培養。
5.根據權利要求1所述的制備CAR-T細胞的方法，其特征在于：所述重組人IL-2的最終濃度為300～500IU/ml，重組人IL-7的最終濃度為5～8ng/ml，重組人IL-15的最終濃度為5～8ng/ml。
6.根據權利要求1所述的制備CAR-T細胞的方法，其特征在于：所述步驟S2中，感染時添加Polybrene，所述Polybrene的添加濃度為5～10μg/mL。
7.根據權利要求1所述的制備CAR-T細胞的方法，其特征在于：所述步驟S2中共同培養時EGFR-CAR CD4+T細胞和EGFR-CAR CD8+T細胞的比例為1:1～2:1。
8.根據權利要求1所述的制備CAR-T細胞的方法，其特征在于：所述步驟S2中的感染處理后的EGFR-CAR CD4+T細胞和EGFR-CAR CD8+T細胞共同培養時間為10～20天。
9.根據權利要求1～8任一項所述的方法制得的CAR-T細胞。
10.根據權利要求9所述的CAR-T細胞在制備治療或預防癌癥的藥物中的用途。
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