[發(fā)明專利]一種嵌合抗原受體基因修飾的T淋巴細(xì)胞的制備方法、制得的CAR-T細(xì)胞及其用途

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711487885.2
• 申請(qǐng)日: 2017-12-29
• 公開（公告）號(hào): CN108085342A
• 公開（公告）日: 2018-05-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 姜舒;張蕓;紀(jì)惜鑾;鄭思建;楊順;羅朝霞
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳市茵冠生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/867
• 分類號(hào): C12N15/867;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 深圳市博銳專利事務(wù)所 44275
• 代理人: 張明

本發(fā)明公開了一種嵌合抗原受體基因修飾的T淋巴細(xì)胞的制備方法、制得的CAR?T細(xì)胞及其用途，包括以下步驟：S1、將分離得到的CD4+T細(xì)胞與CD8+T細(xì)胞激活；S2、用攜帶EGFR?CAR的重組慢病毒感染上述步驟S1處理后的CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞，將感染處理后得到的EGFR?CAR CD4+T細(xì)胞和EGFR?CAR CD8+T細(xì)胞共同培養(yǎng)，以促進(jìn)EGFR?CAR CD8+T細(xì)胞增殖。與現(xiàn)有技術(shù)相比，將EGFR?CAR CD4+T細(xì)胞與EGFR?CAR CD8+T細(xì)胞共培養(yǎng)，可使得EGFR?CAR CD8+T細(xì)胞的增殖率提高2倍以上，制得的CAR?T細(xì)胞具有廣泛的應(yīng)用前景，且具有良好的殺瘤效果。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及細(xì)胞免疫學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種嵌合抗原受體基因修飾的T淋巴細(xì)胞(Chimeric Antigen Receptor T-Cell，CAR-T細(xì)胞)的制備方法、制得的CAR-T細(xì)胞及其用途。

背景技術(shù)

T淋巴細(xì)胞簡(jiǎn)稱T細(xì)胞，是機(jī)體免疫系統(tǒng)內(nèi)功能最重要的細(xì)胞群之一，維持著機(jī)體正常的免疫功能，按細(xì)胞表面標(biāo)識(shí)分子的不同，T細(xì)胞可分為CD4+和CD8+亞群。根據(jù)T細(xì)胞所處的活化階段，T細(xì)胞可分為初始T細(xì)胞(TN)、效應(yīng)T細(xì)胞(TEM)和記憶性T細(xì)胞(TCM)。初始CD4+T細(xì)胞接受抗原刺激后又可分化為Th1細(xì)胞、Th2細(xì)胞、Th3細(xì)胞，其中Th1細(xì)胞可通過(guò)分泌IL-2和IFN-γ刺激細(xì)胞毒性CD8+T細(xì)胞(CD8+CTL)的增殖和分化，CTL可特異性殺傷腫瘤細(xì)胞，同時(shí)還可通過(guò)分泌TNF直接誘導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡。

免疫治療(Immunotherapy)是通過(guò)提高機(jī)體自身的抗腫瘤免疫能力來(lái)殺滅腫瘤細(xì)胞的一種治療方法，具有特異性強(qiáng)、不良反應(yīng)輕和能夠長(zhǎng)期記憶等特點(diǎn)，是一種較理想的治療策略，被稱為繼手術(shù)、放療和化療之后的第四種腫瘤治療方法。其中，嵌合抗原受體(chimeric antigen receptor，CAR)修飾的T淋巴細(xì)胞(CAR-T)技術(shù)是新近迅速發(fā)展的一種細(xì)胞免疫治療技術(shù)，通過(guò)基因工程方法修飾T淋巴細(xì)胞，該方法能夠克服腫瘤局部免疫抑制微環(huán)境和宿主免疫耐受狀態(tài)，提高抗腫瘤的靶向性、殺傷活性及持久性。鑒于CAR-T技術(shù)的優(yōu)勢(shì)，近年來(lái)該技術(shù)發(fā)展迅猛。2017年8月31日，諾華(Novartis)公司突破性CAR-T細(xì)胞療法Kymriah(tisagenlecleucel，曾用名CTL019)獲得FDA批準(zhǔn)上市，適應(yīng)癥是急性淋巴性白血病(ALL)的25歲以下患者。Kymriah成為人類歷史上首款CAR-T細(xì)胞療法。2017年10月18日，美國(guó)FDA宣布批準(zhǔn)了Kite Pharma的CAR-T療法Yescarta(axicabtagene ciloleucel)上市，治療罹患特定類型的大B細(xì)胞淋巴瘤成人患者。這是美國(guó)FDA批準(zhǔn)的首款針對(duì)特定非霍奇金淋巴瘤的CAR-T療法，也是人類歷史上第二款獲批的CAR-T療法。

盡管CAR-T技術(shù)已經(jīng)有了突破性的進(jìn)展，然而CAR-T技術(shù)仍存在一些瓶頸問(wèn)題還未解決，如CAR-T細(xì)胞的擴(kuò)增數(shù)量有限，進(jìn)而限制了CAR-T細(xì)胞的殺傷效力。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是：提供一種能夠解決CAR-T細(xì)胞擴(kuò)增受限問(wèn)題的嵌合抗原受體基因修飾的T淋巴細(xì)胞的制備方法、制得的CAR-T細(xì)胞及其用途。

為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：一種嵌合抗原受體基因修飾的T淋巴細(xì)胞的制備方法，包括以下步驟：

S1、將分離得到的CD4+T細(xì)胞與CD8+T細(xì)胞激活；

S2、用攜帶表皮生長(zhǎng)因子受體(Epidermal growth factor receptor，EGFR)-CAR的重組慢病毒感染上述步驟S1處理后的CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞，將得到的EGFR-CAR CD4+T細(xì)胞和EGFR-CAR CD8+T細(xì)胞共同培養(yǎng)。