[發明專利]皮膚細胞噴霧及其制備方法

在審

• 申請號: 201711484119.0
• 申請日: 2017-12-29
• 公開（公告）號: CN107899074A
• 公開（公告）日: 2018-04-13
• 發明（設計）人: 李小麗;陳昌盛;劉偉強
• 申請（專利權）人: 深圳清華大學研究院
• 主分類號: A61L27/20
• 分類號: A61L27/20;A61L27/24;A61L27/38;A61L27/50;A61L27/60;A61L27/54
• 代理公司: 深圳市鼎言知識產權代理有限公司44311
• 代理人: 曾昭毅,鄭海威

技術領域

本發明涉及生物醫用材料領域，尤其涉及一種應用于皮膚組織損傷修復領域的皮膚細胞噴霧及其制備方法。

背景技術

皮膚是人體最大，也是最重要的器官之一，燒燙傷治療是臨床外科手術最重要的領域之一。創面燒傷程度一般分四級：淺度、淺二度、深二度和三度，淺層皮膚缺損后，隨著表皮細胞增殖、分化和遷移，皮膚得以再生修復。如果是深度(深二度和三度)燒傷患者，創面的修復常需要通過各種皮片移植手術才能完成。深度燒傷創面的修復目前主要采用“拆東墻補西墻”的自體皮片移植，如深度燒傷創面面積不大，供皮區較充足，可采用自體大張皮或網狀皮移植，創面愈合后瘢痕增生較輕，外觀和功能較理想。盡管該方法成功救治了許多大面積深度燒傷患者，但是也帶來了諸多問題：一是：創面修復時間過長，增加了醫療費用，且在漫長的創面修復過程中常發生感染、器官功能不全等并發癥，甚至危及生命；二是：由于缺乏真皮層，移植自體表皮后，即使病人能得到及時救治完成創面的封閉，但后期會出現瘢痕攣縮畸形和功能障礙，是一個目前亟待攻克的難題。

為了解決臨床上治療深度燒傷、瘢痕整形患者的需求，異體真皮和人工皮膚產品孕育而生。由于異體皮膚涉及病毒傳染風險、倫理問題、社會觀念、來源限制等多重因素，異體皮膚在臨床使用中受到極大的限制，而且價格及其昂貴。人工皮膚替代物被用于深度燒傷真皮修復，并取得良好的治療效果。目前市場上的人工皮膚有：等產品。然而仍然存在諸多問題。如移植成活率較低，制備周期長，不易儲存運輸，大面積組織工程皮膚制備技術尚未解決等問題尚未解決。

干細胞治療技術是組織工程的一大飛躍，是生物材料與細胞協同作用修復缺損組織的一大進步。在治療皮膚損傷方面，干細胞治療法是一種完美治愈皮膚缺損的新興手段，可以替代目前市場上的人工皮膚，并具有顯著的優勢。如干細胞通過分泌一些生物活性因子，誘導體內成纖維細胞和血管內皮細胞等修復細胞的遷移、浸入和增殖，可以永久性修復創面，尤其是瘢痕少、攣縮小、觸感柔軟、活動度好、無功能障礙。目前細胞治療方法一般采用干細胞與生物材料支架協同作用治療。目前支架主要有兩大類：一類是人工合成的真皮支架，另一類是基因天然材料的人工真皮支架。然而此類方法對支架材料的性能具有較高的要求，如孔徑，力學性能，材料的韌性，生物相容性等，并且具有手術操作復雜，活動度差，材料價格昂貴等缺陷。

發明內容

鑒于上述狀況，本發明提供一種應用于皮膚組織損傷修復領域的皮膚細胞噴霧及其制備方法。

一種皮膚細胞噴霧的制備方法，其包括如下步驟：

A.配置營養液，所述營養液為乳酸鹽溶液、細胞培養基混合溶液、生長因子中的兩種或幾種組合；

B.配置高分子懸液，所述高分子懸液中的高分子為透明質酸鈉、膠原、明膠、硫酸軟骨素、海藻酸鈉、絲素蛋白、殼聚糖、多肽中的一種或幾種組合；

C.制備混合細胞懸液，選取真皮干細胞、表皮干細胞、骨髓間充質干細胞、祖細胞、毛囊干細胞、造血干細胞、脂肪干細胞、角質細胞、成纖維母細胞、T細胞、臍帶間充質干細胞、胎盤間充質干細胞、羊水間充質干細胞中的一種或者幾種組合，置于培養皿中，加入細胞特定的培養基，制得所述混合細胞懸液；

D.制備皮膚細胞噴霧，將步驟A、B、C中所得的營養液、高分子懸液、混合細胞懸液中的一種或幾種混合，制得所述皮膚細胞噴霧并置于噴霧裝置內。

優選地，所述乳酸鹽溶液由氯化鈉、乳酸鈉、氯化鈣、氯化鉀及注射用水組成，所述氯化鈉的濃度為0.05-0.15mol/L，所述乳酸鈉的濃度為0.02-0.03mol/L，所述氯化鈣的濃度為0.001-0.002mol/L，所述氯化鉀的濃度為0.001-0.005mol/L，所述乳酸鹽溶液pH值為6.0-7.5。

優選地，所述細胞培養基混合溶液由選取DMEM細胞培養基、RPMI 1640細胞培養基、MEM細胞培養基、1640細胞培養基、DMEM/F12細胞培養基、IMDM細胞培養基、McCoy5A細胞培養基、KSFM細胞培養基中的一種或幾種組合，再添加血清蛋白和青霉素/鏈霉素混合溶液，或生長因子中的一種或幾種組合而獲得，所述生長因子的濃度為0.5-10ng/mL。所述青霉素/鏈霉素混合溶液為雙抗溶液。

優選地，所述生長因子由堿性成纖維細胞生長因子、表皮生長因子、轉化生長因子、血小板衍生生長因子、血管內皮生長因子、肝細胞生長因子、胰島素生長因子中的一種或幾種構成。