[發(fā)明專利]一種利拉魯肽的合成方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711476319.1
• 申請(qǐng)日: 2017-12-29
• 公開（公告）號(hào): CN107903317A
• 公開（公告）日: 2018-04-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 玄其存;王蔡典;李杰;肖英;周奕;趙呈青
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇諾泰澳賽諾生物制藥股份有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/605
• 分類號(hào): C07K14/605;C07K1/08;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 連云港潤(rùn)知專利代理事務(wù)所32255
• 代理人: 劉喜蓮

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種多肽藥物合成領(lǐng)域，特別涉及GLP-1受體激動(dòng)素一種利拉魯肽的合成方法。

背景技術(shù)

利拉魯肽，英文名：Liraglutide。

肽序列為：

H-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln- Ala-Ala-Lys(Pal-γ-Glu)-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH

利拉魯肽由丹麥諾和諾德公司開發(fā)的第一個(gè)長(zhǎng)效GLP-1類似物，與人胰高糖素樣肽-1（GLP-1）同源性達(dá)97%。利拉魯肽具有降低血糖，促進(jìn)胰島細(xì)胞再生，輕微延長(zhǎng)胃排空等多種作用，應(yīng)用前景廣泛。

CN 103304660的專利文獻(xiàn)公開了一種利拉魯肽的合成方法，固相合成N端保護(hù)的利拉魯肽直鏈肽，然后合成十六烷基衍生物，脫保護(hù)除去末端保護(hù)，得到目標(biāo)多肽。該方法采用氨基酸逐個(gè)偶聯(lián)的方式，隨著直鏈肽的延長(zhǎng)，大量的疏水性保護(hù)基團(tuán)加劇了分子間的締合作用，部分活性基團(tuán)被包裹其中，工藝中產(chǎn)生不易除去的缺陷肽，增加投料和延長(zhǎng)時(shí)間無(wú)法根本上解決問(wèn)題。

CN 102875665的專利文獻(xiàn)公開了一種合成利拉魯肽的方法，將利拉魯肽分成5個(gè)片段，先合成第 1 至第 4氨基酸、第 5 至第 10 氨基酸、第 11 至第 16 氨基酸、第17至第 24 氨基酸以及第25 至第 31氨基酸，然后5個(gè)多肽片段對(duì)接合成利拉魯肽，縮短合成周期。雖然該方法可以同時(shí)偶聯(lián)5個(gè)片段，但是5個(gè)片段均需要大量的樹脂，大大提高了生產(chǎn)成本，并且多次的裂解在產(chǎn)業(yè)化增加大量的操作步驟，同時(shí)也產(chǎn)生過(guò)多的廢液。

因此，本領(lǐng)域迫切需要提供一種利拉魯肽的合成方法，以解決現(xiàn)有利拉魯肽合成過(guò)程中存在的雜質(zhì)多，純度和收率低，成本昂貴，操作步驟繁瑣，廢液過(guò)量的問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)現(xiàn)有合成過(guò)程中所存在的雜質(zhì)多，純度和收率低，成本昂貴，操作步驟繁瑣，廢液過(guò)量，不利于工業(yè)化生產(chǎn)的問(wèn)題，提供一種新的、利拉魯肽的合成方法。

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是通過(guò)以下的技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明是一種利拉魯肽的合成方法，其特點(diǎn)是，其步驟如下：

(1) 固相合成利拉魯肽序列的第1-4位氨基酸作為第一片段，

(2) 固相合成利拉魯肽序列的第5-31位氨基酸，脫除20位Lys 的側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)并偶聯(lián)Pal-γ-Glu-Otbu，作為第二片段；

(3) 第一片段與第二片段液相偶聯(lián)，合成全保護(hù)利拉魯肽，經(jīng)裂解沉淀，得到利拉魯肽。

步驟(1)中，第一片段與第二片段所用的樹脂優(yōu)選為2- CTC樹脂。

步驟(2)中，第二片段中20位Lys的側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)優(yōu)選為催化氫化脫除的Alloc。

步驟(1) (2)中，合成第一片段與第二片段的所用的縮合劑優(yōu)選為DIC/HOBt，HBTU/HOBT/DIEA，PyBop/HOBT/DIEA其中的一種或多種；所用的反應(yīng)溶劑優(yōu)選為DCM、DMF、NMP、DMSO中的一種或多種組合；所使用的Fmoc脫除試劑優(yōu)選為v/v20%哌啶/DMF溶液。

步驟(1) (2)中，第一片段與第二片段全保護(hù)裂解試劑優(yōu)選為v/v15%～25%（最優(yōu)選20%）TFE/DCM或v/v0.05%～0.15%（最優(yōu)選0.1%）TFA/DCM。最優(yōu)選為v/v15%～25%（最優(yōu)選20%）TFE/DCM。

步驟(3)中第一片段與第二片段液相偶聯(lián)采用的縮合劑優(yōu)選為DCC/HOSu組合或EDC·HCl/HOSU組合。最優(yōu)選為DCC/HOSu組合

步驟(3)采用的裂解試劑優(yōu)選為TFA:Thioanisole:Anisole:EDT=90:4～6:2～4:1～3，最優(yōu)選為TFA:Thioanisole:Anisole:EDT＝90:5:3:2。

本發(fā)明所述的一種利拉魯肽的合成方法，其進(jìn)一步優(yōu)選的技術(shù)方案步驟如下（下述技術(shù)方案中，各原料的量可以按照需要適當(dāng)取用）：

（1）Fmoc-Gly-2-CTC樹脂的制備：

2-CTC樹脂加入到固相反應(yīng)器中，加入適量 DCM溶脹樹脂；抽干溶劑，加入Fmoc-Gly-OH，DIEA，DMF溶液，攪拌反應(yīng)；抽干溶劑，加入甲醇/DCM溶液，封閉；DCM與甲醇交替洗滌若干次；真空干燥后，得到Fmoc-Gly-2-CTC樹脂；

（2）多肽片段1的制備：