[發明專利]CD151蛋白表達量ELISA檢測方法及試劑盒在審
| 申請號： | 201711473860.7 | 申請日： | 2017-12-29 |
| 公開（公告）號： | CN108956997A | 公開（公告）日： | 2018-12-07 |
| 發明（設計）人： | 黃華藝;譚春艷;周瑩;梁莉;姜烈君 | 申請（專利權）人： | 廣西壯族自治區人民醫院 |
| 主分類號： | G01N33/68 | 分類號： | G01N33/68 |
| 代理公司： | 廣西南寧匯博專利代理有限公司 45114 | 代理人： | 鄒超賢 |
| 地址： | 530021 廣*** | 國省代碼： | 廣西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 表達量 試劑盒 生物醫藥技術 腫瘤患者血清 診斷標志物 第二抗體 抗體包被 快速檢測 快速診斷 預后判斷 治療效果 高表達 酶標記 潛在的 血清學 終止液 血清 抗體 提示 參考 檢測 研究 | ||
1.CD151蛋白表達量的ELISA試劑盒，其特征在于：包括CD151抗體包被96孔反應板；CD151抗體-HRP酶標記第二抗體；TMB顯色液；H2SO4終止液；洗滌液；ELISA 試劑盒組成：
。
2.根據權利要求1所述的CD151蛋白表達量ELISA檢測方法，其特征在于：包括如下步驟：
（1）制備ELISA反應試劑和優化反應條件：制備單抗雜交瘤細胞-小鼠腹水模型；單抗雜交瘤-小鼠腹水CD151抗體的純化；CD151抗體-HRP酶標記篩選；純化CD151抗體-HRP酶標記結合物；
（2）單抗雜交瘤-小鼠腹水CD151抗體的純化；CD151抗體-HRP酶標記篩選；純化CD151抗體-HRP酶標記結合物；
（3）采用ELISA技術對正常對照和待測樣本血清中CD151蛋白進行檢測；
（4）抗原抗體結合后留于固相載體；
（5）與酶標抗體反應后形成產物；
（6）加入顯色液反應后，加入H2SO4終止反應，根據有色產物的深淺進行結果分析。
3.根據權利要求1所述的CD151蛋白表達量ELISA檢測方法，其特征在于：所述采用ELISA技術對正常血清或待檢標本血清進行檢測，具體為：
A、取正常血清或待檢標本血清，與固相載體表面的CD151抗體進行第一次孵育，用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原-抗體復合物與液體中的其他物質分開；
B、再加入HRP酶標記抗體進行第二次孵育。
4.根據權利要求3所述的CD151蛋白表達量ELISA檢測方法，其特征在于：步驟A中CD151抗體稀釋到2μg/mL，包板100uL，包板條件為2—5℃放置8—15小時。
5.根據權利要求4所述的CD151蛋白表達量ELISA檢測方法，其特征在于：步驟A中取100uL待檢血清加入孔板中，40—50min后PBST清洗3—5次，每次洗板后拍板。
6.根據權利要求3所述的CD151蛋白表達量ELISA檢測方法，其特征在于：步驟A中CD151抗體第一次孵育溫度為37℃，時間為40—50min，在使用PBST清洗3—5次，每次洗板后拍板。
7.根據權利要求3所述的CD151蛋白表達量ELISA檢測方法，其特征在于：步驟B中CD151抗體第二次孵育溫度為37℃，時間為40—50min，在使用PBST清洗3—5次，每次洗板后拍板。
8. 根據權利要求5—7任一項所述的CD151蛋白表達量ELISA檢測方法，其特征在于：清洗完畢后加入90—110uLTMB顯色液，4—8min后加入40—60uL2M H2SO4終止反應，得到實驗結果。
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