[發(fā)明專利]CD151蛋白表達(dá)量ELISA檢測(cè)方法及試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711473860.7
• 申請(qǐng)日: 2017-12-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108956997A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-12-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃華藝;譚春艷;周瑩;梁莉;姜烈君
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68
• 代理公司: 廣西南寧匯博專利代理有限公司 45114
• 代理人: 鄒超賢

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體是CD151蛋白表達(dá)量ELISA檢測(cè)方法及試劑盒，CD151蛋白表達(dá)量的ELISA試劑盒包括CD151抗體包被96孔反應(yīng)板；CD151抗體?HRP酶標(biāo)記第二抗體；TMB顯色液；H2SO4終止液。本發(fā)明提供的一種CD151蛋白表達(dá)量ELISA檢測(cè)方法及試劑盒，該檢測(cè)方法能夠快速檢測(cè)血清中CD151蛋白表達(dá)量，研究顯示CD151蛋白在各種腫瘤患者血清中高表達(dá)。提示CD151蛋白作為一種潛在的血清學(xué)診斷標(biāo)志物，可為臨床快速診斷、治療效果判斷和預(yù)后判斷提供參考。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種CD151蛋白表達(dá)量ELISA檢測(cè)方法及試劑盒。

背景技術(shù)

惡性腫瘤已經(jīng)成為嚴(yán)重威脅人類健康的主要疾病。我國(guó)腫瘤發(fā)生人數(shù)不斷升高，死亡率從70年代的83.65/10萬(wàn)上升到90年代的108.26/10萬(wàn)，上升了29.42％。廣西的惡性腫瘤死亡率也呈上升趨勢(shì)，僅1996年(34700人死亡)就比1991年增加12700人，增長(zhǎng)近57.73％；廣西的惡性腫瘤死亡標(biāo)化減壽率為9.88‰；廣西居民一生(按出生至74歲計(jì)算)死于惡性腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)約為1/10左右(累積危險(xiǎn)度10.66％)；惡性腫瘤使廣西人口平均期望壽命減少2.13歲。惡性腫瘤引發(fā)了沉重的社會(huì)經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，據(jù)估算每年用于癌癥病人的醫(yī)療費(fèi)用約800億元，約占衛(wèi)生總費(fèi)用的20％。全國(guó)因癌癥損失的失能調(diào)整生命年為185.1萬(wàn)人年，以此估算的經(jīng)濟(jì)損失高達(dá)1432.3億元。腫瘤的早診早治是目前預(yù)防治療腫瘤的有效手段。

CD151是四跨膜蛋白超家族(transmembrane 4superfamily，TM4SF)中的一個(gè)成員，它能將整合素接收到的生物信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)到細(xì)胞內(nèi)的其他關(guān)鍵蛋白質(zhì)(如激酶)，參與細(xì)胞的黏附、遷移、形成半橋粒結(jié)構(gòu)等多種病理生理過(guò)程，在腫瘤細(xì)胞的遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移中起重要作用，其過(guò)表達(dá)與多種癌癥的預(yù)后不良有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，CD151是癌蛋白，在乳腺癌、前列腺癌、胃癌、肝癌、肺癌、結(jié)直腸癌、膀胱癌、膽囊癌等腫瘤中高表達(dá)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)小鼠模型中敲除CD151后腫瘤發(fā)生延遲，原發(fā)性腫瘤減少。因此，CD151是腫瘤診斷和預(yù)后判斷的一個(gè)標(biāo)志，也是靶向治療的一個(gè)潛在重要靶點(diǎn)。CD151蛋白除了在細(xì)胞膜表達(dá)外，其分子的胞外片斷部分在酶的作用下可發(fā)生水解而釋放到血循環(huán)中，并可能反應(yīng)腫瘤的發(fā)展?fàn)顟B(tài)，是一種潛在的血清學(xué)診斷標(biāo)志物。開(kāi)展CD151蛋白的表達(dá)水平及血清學(xué)指標(biāo)檢測(cè)，有利于開(kāi)展臨床快速診斷、治療效果判斷和預(yù)后判斷的研究和應(yīng)用

目前，國(guó)內(nèi)外報(bào)道的CD151檢測(cè)方法都不很成熟，而且僅用于科研實(shí)驗(yàn)，尚未開(kāi)發(fā)成適用于臨床檢測(cè)的試劑盒，不利于臨床常規(guī)使用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的上述缺陷，提供一種CD151蛋白表達(dá)量ELISA檢測(cè)方法及試劑盒。

為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用了如下技術(shù)方案：

CD151蛋白表達(dá)量的ELISA試劑盒，包括CD151抗體包被96孔反應(yīng)板；CD151抗體- HRP酶標(biāo)記第二抗體；TMB顯色液；H2SO4終止液；洗滌液；ELISA試劑盒組成：

此外，本發(fā)明還提供如下附屬技術(shù)方案：

優(yōu)選地，所述的CD151蛋白表達(dá)量ELISA檢測(cè)方法，包括如下步驟：

(1)制備ELISA反應(yīng)試劑和優(yōu)化反應(yīng)條件：制備單抗雜交瘤細(xì)胞-小鼠腹水模型；單抗雜交瘤-小鼠腹水CD151抗體的純化；CD151抗體-HRP酶標(biāo)記篩選；純化CD151抗體-HRP 酶標(biāo)記結(jié)合物；

(2)單抗雜交瘤-小鼠腹水CD151抗體的純化；CD151抗體-HRP酶標(biāo)記篩選；純化CD151抗體-HRP酶標(biāo)記結(jié)合物；

(3)采用ELISA技術(shù)對(duì)正常對(duì)照和待測(cè)樣本血清中CD151蛋白進(jìn)行檢測(cè)；

(4)抗原抗體結(jié)合后留于固相載體；