[發(fā)明專利]一株產(chǎn)海藻膠降解酶的海洋細菌及應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711471996.4
• 申請日: 2017-12-29
• 公開（公告）號: CN108004178A
• 公開（公告）日: 2018-05-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 湯凱;詹佩文;韓昱;陳小鳳;林丹
• 申請（專利權(quán)）人: 廈門大學(xué)
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P19/04;C12N9/88;C12R1/01
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務(wù)所(普通合伙) 35200
• 代理人: 馬應(yīng)森

一株產(chǎn)海藻膠降解酶的海洋細菌及應(yīng)用，涉及海藻膠。產(chǎn)海藻膠降解酶的海洋細菌(Maribacter sp.)T28，保藏號為CGMCC 1.15788。產(chǎn)海藻膠降解酶的海洋細菌在制備海藻膠中應(yīng)用。海藻膠的制備方法：將表層海水水樣涂布于RO種子培養(yǎng)基培養(yǎng)，得到形態(tài)各異的單菌落，并純化后保存；將初篩后得到的保種細菌純化接入海藻酸鈉液體培養(yǎng)基中，搖床培養(yǎng)，分離能降解海藻酸鈉的海洋細菌。海藻膠降解酶的制備方法：從保種管中取出菌株涂布于2216E培養(yǎng)基平板上，純化后接入RO種子培養(yǎng)基中，搖床培養(yǎng)至對數(shù)生長期，得種子液；將種子液轉(zhuǎn)接發(fā)酵培養(yǎng)基，搖床培養(yǎng)得發(fā)酵液；將發(fā)酵液經(jīng)離心得上清液，即為海藻膠降解酶。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及海藻膠，尤其是涉及一株產(chǎn)海藻膠降解酶的海洋細菌及應(yīng)用。

背景技術(shù)

海藻膠是一類常從褐藻類細胞壁中提取出來的天然多糖，其本質(zhì)是由β-D-甘露糖醛酸(M區(qū))和α-L-古洛糖醛酸(G區(qū))通過糖苷鍵連接而成的線性天然高分子。近年來，隨著海藻寡糖多種生理活性的發(fā)現(xiàn)，目前獲取海藻寡糖的方法已有諸如物理降解法、酸降解法、氧化降解法和酶降解法；其中，酶降解法反應(yīng)條件溫和、底物特異性高，在寡糖制備的各個方面均優(yōu)于物理和化學(xué)方法，從不同的途徑尋找和生產(chǎn)具有高活性的海藻膠降解酶已成為當(dāng)前的研究熱點。該海洋細菌產(chǎn)生的海藻膠降解酶，不僅豐富了酶資源庫，而且對研究開發(fā)海洋生物資源具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一目的是提供產(chǎn)海藻膠降解酶的海洋細菌(Maribacter sp.)T28。

本發(fā)明的第二目的是提供產(chǎn)海藻膠降解酶的海洋細菌(Maribacter sp.)T28在制備海藻膠的應(yīng)用。

本發(fā)明的第三目的是提供海藻膠的制備方法。

本發(fā)明的第四目的是提供海藻膠降解酶的制備方法。

所述產(chǎn)海藻膠降解酶的海洋細菌(Maribacter sp.)T28，已于2017年06月22日保藏至中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為：CGMCC 1.15788，地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學(xué)院微生物研究所，郵編：100101。

T28為革蘭氏陰性、好氧、桿狀的海洋細菌，其基因組中編碼的數(shù)個海藻膠降解酶，隸屬碳水化合物活性酶(CAZyme)中的多糖裂解酶(Polysaccharide Lyase，PL)家族，通過其裂解機制將海藻膠降解為具有多種生理活性的海藻寡糖。

所述產(chǎn)海藻膠降解酶的海洋細菌(Maribacter sp.)T28可在制備海藻膠中應(yīng)用。

所述海藻膠的制備方法包括以下步驟：

1)初篩：將表層海水水樣涂布于RO種子培養(yǎng)基培養(yǎng)，得到形態(tài)各異的單菌落，并純化后保存；

在步驟1)中，所述表層海水可由臺灣龜山島淺灘熱液采集的表層海水水樣；所述RO種子培養(yǎng)基的組成可為：蛋白胨1.0g，酵母膏1.0g，乙酸鈉1.0g，氯化鈉20.0g，氯化鉀0.3g，七水合硫酸鎂0.5g，氯化銨0.3g，磷酸氫二鉀0.3g，二水合氯化鈣38.0mg，蒸餾水1000g，pH 8.0；所述培養(yǎng)可在30℃下培養(yǎng)14d；所述純化后保存可采用體積百分比30％的甘油，甘油與菌液的體積比可為1︰1；保存的溫度可為-80℃。

2)復(fù)篩：將步驟1)初篩后得到的保種細菌純化接入海藻酸鈉液體培養(yǎng)基中，搖床培養(yǎng)，分離能降解海藻酸鈉的海洋細菌。

在步驟2)中，所述海藻酸鈉液體培養(yǎng)基可采用30ml海藻酸鈉液體培養(yǎng)基，所述海藻酸鈉液體培養(yǎng)基的組成可為海藻酸鈉2.0g，酵母膏1.0g，乙酸鈉1.0g，氯化銨0.5g，氯化鈉20.0g，氯化鉀0.3g，七水合硫酸鎂0.5g，二水合氯化鈣0.05g，蒸餾水1000g,pH 7.6；所述搖床培養(yǎng)可在28℃下160rpm搖床培養(yǎng)。