[發明專利]一株產海藻膠降解酶的海洋細菌及應用

在審

• 申請號: 201711471996.4
• 申請日: 2017-12-29
• 公開（公告）號: CN108004178A
• 公開（公告）日: 2018-05-08
• 發明（設計）人: 湯凱;詹佩文;韓昱;陳小鳳;林丹
• 申請（專利權）人: 廈門大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P19/04;C12N9/88;C12R1/01
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所(普通合伙) 35200
• 代理人: 馬應森

1.產海藻膠降解酶的海洋細菌(Maribacter sp.)T28，已于2017年06月22日保藏至中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為：CGMCC 1.15788。

2.如權利要求1所述產海藻膠降解酶的海洋細菌(Maribacter sp.)T28在制備海藻膠中應用。

3.如權利要求1所述海藻膠的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

1)初篩：將表層海水水樣涂布于RO種子培養基培養，得到形態各異的單菌落，并純化后保存；

2)復篩：將步驟1)初篩后得到的保種細菌純化接入海藻酸鈉液體培養基中，搖床培養，分離能降解海藻酸鈉的海洋細菌。

4.如權利要求3所述海藻膠的制備方法，其特征在于在步驟1)中，所述表層海水由臺灣龜山島淺灘熱液采集的表層海水水樣。

5.如權利要求3所述海藻膠的制備方法，其特征在于在步驟1)中，所述RO種子培養基的組成為蛋白胨1.0g，酵母膏1.0g，乙酸鈉1.0g，氯化鈉20.0g，氯化鉀0.3g，七水合硫酸鎂0.5g，氯化銨0.3g，磷酸氫二鉀0.3g，二水合氯化鈣38.0mg，蒸餾水1000g，pH 8.0；所述培養可在30℃下培養14d；所述純化后保存可采用體積百分比30％的甘油，甘油與菌液的體積比可為1︰1；保存的溫度可為-80℃。

6.如權利要求3所述海藻膠的制備方法，其特征在于在步驟2)中，所述海藻酸鈉液體培養基采用30ml海藻酸鈉液體培養基，所述海藻酸鈉液體培養基的組成為海藻酸鈉2.0g，酵母膏1.0g，乙酸鈉1.0g，氯化銨0.5g，氯化鈉20.0g，氯化鉀0.3g，七水合硫酸鎂0.5g，二水合氯化鈣0.05g，蒸餾水1000g,pH 7.6；所述搖床培養可在28℃下160rpm搖床培養。

7.海藻膠降解酶的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

1)從保種管中取出菌株涂布于2216E培養基平板上，純化后接入RO種子培養基中，搖床培養至對數生長期，得種子液；

2)將步驟1)得到的種子液轉接發酵培養基，搖床培養，得發酵液；

3)將步驟2)得到的發酵液經高速離心，得上清液，即為海藻膠降解酶。

8.如權利要求7所述海藻膠降解酶的制備方法，其特征在于在步驟1)中，所述純化經過2～3次，所述2216E培養基的組成為：蛋白胨5.0g，酵母膏1.0g，檸檬酸鐵0.1g，氯化鈉19.45g，氯化鎂5.98g，硫酸鈉3.24g，氯化鈣1.8g，氯化鉀0.55g，碳酸鈉0.16g，溴化鉀0.08g，氯化鍶34.0mg，硼酸22.0mg，硅酸鈉4.0mg，氟化鈉2.40mg，硝酸銨1.60mg，磷酸氫二鈉8.0mg，蒸餾水1000g，pH7.6；所述RO種子培養基的配方可為：蛋白胨1.0g，酵母膏1.0g，乙酸鈉1.0g，氯化鈉20.0g，氯化鉀0.3g，七水合硫酸鎂0.5g，氯化銨0.3g，磷酸氫二鉀0.3g，二水合氯化鈣38.0mg，蒸餾水1000g，pH8.0；所述搖床培養條件可在28℃下160rpm搖床培養24h。

9.如權利要求7所述海藻膠降解酶的制備方法，其特征在于在步驟2)中，所述種子液的接種量為0.2％；所述發酵培養基的配方為：海藻酸鈉2.0g，酵母膏0.5g，氯化銨0.5g，海鹽23.0g，Tris-HCl 50mM，蒸餾水1000g，pH 7.8；所述搖床培養的條件可在28℃，160rpm搖床培養48h。

10.如權利要求7所述海藻膠降解酶的制備方法，其特征在于在步驟3)中，所述離心的條件為12000g×10min。