[發明專利]一種靈芝中17種三萜化合物含量的檢測方法

在審

• 申請號: 201711468785.5
• 申請日: 2017-12-29
• 公開（公告）號: CN108181396A
• 公開（公告）日: 2018-06-19
• 發明（設計）人: 唐慶九;馮娜;劉偉;王金艷;周帥;張勁松;徐靖
• 申請（專利權）人: 上海市農業科學院;浙江壽仙谷醫藥股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

本發明運用高效液相色譜儀建立了一測多評法，實現了對靈芝子實體中17種三萜含量的測定。

技術領域

本發明涉及藥物分析領域，具體是建立測定靈芝及其產品中三萜類成分的方法。

背景技術

靈芝是一種藥用價值很高的名貴真菌，廣泛分布在中國、日本和南韓等地區，因其多樣的藥理活性而成為備受推崇的保健類食品、藥品的主要原料之一。三萜類化合物是靈芝重要的次級代謝產物，同時也是靈芝的主要活性成分之一。隨著靈芝三萜類化合物研究的深入，目前已從靈芝子實體、孢子粉、菌絲體中分離得到300多種三萜類化合物。而且，靈芝品種繁多，即使同種靈芝不同產地間三萜類化合物的含量也差異很大，更不用說不同種靈芝間三萜類化合物含量及種類的差異。因此，靈芝及其產品中三萜類成分評價標準的建立就顯得非常重要。

現有靈芝三萜類成分的測定分析多集中在比色法和HPLC法，也有關于靈芝三萜測定分析的UPLC法文獻報道。比色法多用齊墩果酸或熊果酸作為對照品，方法特異性較差，結果偏高；HPLC法雖然可以精確定量，但由于靈芝三萜對照品的缺乏，現有的HPLC方法多在靈芝三萜類指紋圖譜的對比和部分中極性三萜的測定分析，仍具有較多的局限性。

本發明建立的靈芝三萜類物質測定方法，選用小粒徑、高柱效的C18薄殼柱，運用HPLC法同時對靈芝中的17種三萜類成分的含量進行準確定量，有效地縮短了分析時間、降低了檢測成本，不僅涵蓋已有較多報道的中極性三萜，還包括尚未見報道但具有較好藥理活性的弱極性三萜，更具有代表性和應用性。

本發明建立的一測多評法，突破了原有靈芝三萜測定方法的局限，以靈芝子實體中普遍存在、成本低、有效、易得的靈芝酸A為內參物，先采用外標定量法計算出靈芝酸A的含量，再通過各成分間內在的函數關系，依據相對校正因子計算出其他16種三萜的含量，實現了多個成分含量的同步測定。既具有外標定量法的準確性，又解決了對照品不足的問題，具有成本低、應用廣、準確高效等優點，可以用于靈芝及其相關產品的多指標同步質量控制。

發明內容

本發明的目的是克服現有靈芝三萜測定方法的局限性，提供一種成本低、適用范圍廣、高效準確的靈芝三萜類成分的檢測方法。

本發明涉及一種靈芝中17種三萜化合物含量的檢測方法，包括如下步驟：采用高效液相色譜法，以靈芝酸A為內參物，通過一測多評法測定靈芝中17種三萜化合物的含量。

本發明涉及一種靈芝中17種三萜化合物含量的檢測方法，包括如下步驟：采用高效液相色譜法，分別以17種三萜各自的對照品為外標物，通過外標定量法計算各待測樣品中各三萜的含量，并將外標定量法計算結果與一測多評法計算結果進行比較。

本發明一種靈芝中17種三萜化合物含量的檢測方法，具體操作過程包括以下步驟：

(1)靈芝子實體的預處理步驟，將靈芝子實體粉末加入溶劑浸提，得到浸提液，過濾，得到濾液，濾液真空干燥后用甲醇復溶，經過濾后得到樣品溶液；

(2)高效液相色譜檢測步驟，對待測樣品溶液進行高效液相色譜分析；

(3)指標成分是三萜類成分：

靈芝酸C2、靈芝酸G、靈芝烯酸B、靈芝酸B、

靈芝烯酸A、靈芝酸A、赤芝酸A、靈芝烯酸D、

靈芝酸D、靈芝酸F、靈芝烯酸F、靈芝酮三醇、

靈芝酸DM、靈芝醇F、靈芝酸T、靈芝醇B、靈芝醛A；

(4)數據分析步驟，建立一測多評分析方法。

更具體地，本發明涉及的靈芝子實體的預處理步驟中，浸提方法包括以下步驟：

所用浸提液為乙酸乙酯、甲醇、乙醇中的一種，優選乙酸乙酯；