[發明專利]一種靈芝中17種三萜化合物含量的檢測方法

在審

• 申請號: 201711468785.5
• 申請日: 2017-12-29
• 公開（公告）號: CN108181396A
• 公開（公告）日: 2018-06-19
• 發明（設計）人: 唐慶九;馮娜;劉偉;王金艷;周帥;張勁松;徐靖
• 申請（專利權）人: 上海市農業科學院;浙江壽仙谷醫藥股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

1.一種靈芝中17種三萜化合物含量的檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：采用高效液相色譜法，以靈芝酸A為內參物，通過一測多評法測定靈芝中17種三萜化合物的含量；

(1)靈芝子實體的預處理步驟，將靈芝子實體粉末加入溶劑浸提，得到浸提液，過濾，得到濾液，濾液真空干燥后用甲醇復溶，經過濾后得到樣品溶液；

(2)高效液相色譜檢測步驟，對待測樣品溶液進行高效液相色譜分析；

(3)指標成分是三萜類成分：靈芝酸C2、靈芝酸G、靈芝烯酸B、靈芝酸B、靈芝烯酸A、靈芝酸A、赤芝酸A、靈芝烯酸D、靈芝酸D、靈芝酸F、靈芝烯酸F、靈芝酮三醇、靈芝酸DM、靈芝醇F、靈芝酸T、靈芝醇B、靈芝醛A；

(4)數據分析步驟，建立一測多評分析方法。

2.根據權利要求1的一種靈芝中17種三萜化合物含量的檢測方法，其特征在于，

所述步驟(1)靈芝子實體的預處理步驟中，浸提方法包括以下步驟：

所用浸提液為乙酸乙酯、甲醇、乙醇中的一種，優選乙酸乙酯；

提取方法為超聲提取、60℃加熱提取，優選超聲提取；

提取時間為10-90min，優選30min；

料液比為1:15--1:30，優選1:20；

浸提次數包括一次性浸提或反復浸提；

所述步驟(1)靈芝子實體的預處理步驟中，浸提液的處理包括以下步驟：

浸提液先用分析型濾紙過濾，濾液在40℃進行真空濃縮干燥，濃縮物用甲醇復溶，溶液用0.22μm孔徑的有機相微孔濾膜過濾。

3.根據權利要求1-2的一種靈芝中17種三萜化合物含量的檢測方法，其特征在于，所述步驟(2)高效液相色譜法包括以下步驟：

色譜柱為反相C18薄殼柱，

流動相溶液成分為乙腈-水梯度洗脫，其中水中冰醋酸的濃度為0.00％-0.02％，

其中水中冰醋酸的濃度優選0.01％；

柱溫為20-40℃，優選25℃；

流速0.8-1.2ml/min，優選1.0ml/min；

檢測波長為250-260nm，優選252nm。

色譜柱為Fortis Speed Core C18(150×4.6mm,2.6μm)反相色譜柱，配套使用FortisSpeed Core C18保護柱(12.5mm×4.6mm,2.6μm)；

或者Waters Cortecs C18column(150mm×4.6mm,2.7μm)反相色譜柱。

4.根據權利要求3的一種靈芝中17種三萜化合物含量的檢測方法，其特征在于，流動相的洗脫程序為：

流動相(A)乙腈+(B)0.01％醋酸水(v/v)＝100％(體積)，

0-3min，20-26.5％(A)；

3-16min,26.5％(A)；

16-20min,26.5-28％(A)；

20-35min，28-29％(A)；

35-45min，29-65％(A)；

45-55min，65-75％(A)；

55-65min，75-100％(A)；

65-70min，100％(A)；

71-80min，20％(A)。

5.根據權利要求1-4的一種靈芝中17種三萜化合物含量的檢測方法，其特征在于，以靈芝酸A為內參物；

先用外標定量法測定各待測樣品中靈芝酸A的含量，其他16種三萜化合物的含量則通過各自的相對校正因子計算得到。