[發明專利]一種對腦損傷類疾病有治療作用的細胞亞群及其制備方法

在審

• 申請號: 201711465579.9
• 申請日: 2017-12-28
• 公開（公告）號: CN108559726A
• 公開（公告）日: 2018-09-21
• 發明（設計）人: 鄭佳威;趙雄飛;黃倩瑩;王曉明
• 申請（專利權）人: 上海安集協康生物技術股份有限公司
• 主分類號: C12N5/074
• 分類號: C12N5/074;C12N5/0797;A61P25/00
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

本發明提供了一種對腦損傷類疾病有治療作用的細胞亞群及其制備方法，屬于生物醫藥領域。本發明的細胞亞群來源于成體神經組織或誘導多能干細胞；所述細胞亞群利用特異性標記物進行檢測，所述特異性標記物包括巢蛋白、PAX6、SOX2、波形蛋白、Musashi?1和NGFR。本發明提供的細胞亞群是單一細胞亞群，在體外培養到P5代，純度可達90％以上，細胞活性95％以上，即便連續傳代到第32代依然能保持良好的干性和分化潛能；可通過調節NF?κB通路反應來逆轉腦損傷后的神經元死亡和炎癥反應，且對淋巴細胞和免疫細胞的增殖具有抑制作用。

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，具體涉及一種對腦損傷類疾病有治療作用的細胞亞群及其制備方法。

背景技術

腦損傷通常包括缺血型腦損傷(如腦卒中)，缺血缺氧型腦損傷(如小兒腦癱)和創傷性腦損傷。腦損傷類疾病給個人健康和社會帶來了嚴重的負擔。在發達國家，腦卒中是導致成年人喪失行動能力和死亡的第三大原因。小兒腦癱通常指出生前到出生后一個月內由各種原因引起的非進行性腦損傷或腦發育異常所導致的中樞性運動障礙。臨床上以姿勢與肌張力異常、肌無力、不自主運動和共濟失調等為特征，常伴有感覺、認知、交流、行為等障礙和繼發性骨骼肌肉異常，并可有癲癇發作，該病目前無理想的治療手段，致殘率高，給患者本人及家庭造成的精神負擔和經濟負擔重。

根據衛生部發布的數據計算，我國每年新生兒1600萬人，據不同統計，小兒腦癱發病率在千分之二到千分之五左右，即每年3～8萬人；而由于以往人口出生率高、醫療條件落后導致發病率高、治愈率低等原因，有報道稱我國已有累積小兒腦癱患者500萬人。因此該病危害十分嚴重。

腦損傷如小兒腦癱目前常用的治療方式有物理治療、作業治療、家庭訓練、矯形器等。常用的藥物有腦神經營養藥、肌肉松弛劑等，然而藥物治療只有在必要時才使用，它不能替代功能性訓練。注射用鼠神經生長因子是被SFDA批準的一種生物制劑，提取自小鼠的頜下腺，與人的同源性達90％，采用肌肉注射的方式給藥，據報道對小兒腦癱引起的肌張力、運動發育、姿勢異常、反射異常等癥狀有一定改善效果。

目前所有的治療腦損傷的藥物大多為提供營養，緩解癥狀，不能達到治療的目的。也就是說，目前市場上并沒有特異性治療腦損傷類疾病的有效藥物。在臨床上通常采取藥物和運動康復相結合的辦法。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種對腦損傷類疾病有治療作用的細胞亞群，只通過藥物就可有效治療腦損傷類疾病，見效快，周期短。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種對腦損傷類疾病有治療作用的細胞亞群，所述細胞亞群來源于成體神經組織或誘導多能干細胞；

所述細胞亞群利用特異性標記物進行細胞亞群檢測，所述特異性標記物包括巢蛋白、PAX6、SOX2、波形蛋白、Musashi-1和NGFR；所述細胞亞群檢測的巢蛋白陽性表達率為90％～99％，PAX6陽性表達率為80％～90％，SOX2陽性表達率為90％～9％，波形蛋白的陽性率為95％～99％，Musashi-1的陽性表達率為85％～99％，NGFR的陽性率為40％～60％。

優選的，所述的細胞亞群的制備方法，包括以下步驟：

1)將成體神經組織或誘導多能干細胞的單細胞懸液接種到無血清完全培養基中進行懸浮培養，得到原代細胞；

2)將步驟1)得到的所述原代細胞培養12～16天，得到原代神經細胞亞群，將所述原代神經細胞亞群進行重復的依次進行的消化、傳代培養，傳代至第五代，得P5代細胞；

3)將步驟2)得到的所述P5代細胞進行細胞亞群檢測，檢測陽性率合格的細胞作為種子細胞；

4)將步驟3)得到的所述種子細胞進行擴增傳代培養，傳代至P6代～P9代，得到細胞亞群。