[發明專利]一種對腦損傷類疾病有治療作用的細胞亞群及其制備方法

在審

• 申請號: 201711465579.9
• 申請日: 2017-12-28
• 公開（公告）號: CN108559726A
• 公開（公告）日: 2018-09-21
• 發明（設計）人: 鄭佳威;趙雄飛;黃倩瑩;王曉明
• 申請（專利權）人: 上海安集協康生物技術股份有限公司
• 主分類號: C12N5/074
• 分類號: C12N5/074;C12N5/0797;A61P25/00
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

1.一種對腦損傷類疾病有治療作用的細胞亞群，其特征在于，所述細胞亞群來源于成體神經組織或誘導多能干細胞；

所述細胞亞群利用特異性標記物進行細胞亞群檢測，所述特異性標記物包括巢蛋白、PAX6、SOX2、波形蛋白、Musashi-1和NGFR；所述細胞亞群檢測的巢蛋白陽性表達率為90％～99％，PAX6陽性表達率為80％～90％，SOX2陽性表達率為90％～9％，波形蛋白的陽性率為95％～99％，Musashi-1的陽性表達率為85％～99％，NGFR的陽性率為40％～60％。

2.權利要求1所述的細胞亞群的制備方法，包括以下步驟：

1)將成體神經組織或誘導多能干細胞消化的單細胞懸液接種到無血清完全培養基中進行懸浮培養，得到原代細胞；

2)將步驟1)得到的所述原代細胞培養12～16天，得到原代神經細胞亞群，將所述原代神經細胞亞群進行重復的依次進行的消化和傳代培養，傳代至第五代，得P5代細胞；

3)將步驟2)得到的所述P5代細胞進行細胞亞群檢測，檢測陽性率合格的細胞作為種子細胞；

4)將步驟3)得到的所述種子細胞進行擴增傳代培養，傳代至P6代～P9代，得到細胞亞群。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟1)所述無血清完全培養基以DMEM/F12為基本培養基，包含終濃度為1～5％(v/v)的B-27、0.5～2.5％(v/v)的N2、0.01～0.05ug/ml的神經營養因子，0.01～0.05ug/ml的EGF，0.005～0.025ug/ml的LIF，1.0～3.0mmol/L的L-谷氨酰胺，0.5～1.5mmol/L的丙酮酸鈉和0.5～1.5mmol/L的NAC。

4.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟1)所述懸浮培養為在35℃下，體積分數為5％的二氧化碳條件下培養。

5.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟2)所述消化使用的消化酶為木瓜蛋白酶、DNA酶I和L-半胱氨酸鹽酸鹽消化酶中的一種或幾種。

6.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟3)所述細胞亞群檢測為將所述P5代細胞做細胞流式分析和異源微生物鑒定。

7.權利要求1所述細胞亞群在制備對腦損傷類疾病有治療作用的藥物中的應用。

8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，所述藥物為注射液或滴鼻制劑；所述注射液或滴鼻制劑中細胞亞群的濃度為(1×10⁶～1×10⁷)個細胞/200μL。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，所述注射液的制備方法包括：將所述細胞亞群溶于生理鹽水；所述滴鼻制劑的制備方法包括：將所述細胞亞群負載于微載體上。

10.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，所述藥物的移植途徑包括：鼻腔篩板吸附擴散、腦內局部定點注射、靜脈回輸和鞘內注射。