[發(fā)明專利]一種檢測NT-proBNP的試紙條及其制備方法與應(yīng)用

在審

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• 申請日: 2017-12-28
• 公開（公告）號(hào): CN108226468A
• 公開（公告）日: 2018-06-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫宏浩;趙曉雙
• 申請（專利權(quán)）人: 湖北工業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/533
• 分類號(hào): G01N33/533;G01N33/543;G01N33/558
• 代理公司: 武漢科皓知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 彭勁松

1.一種檢測NT-proBNP的試紙條，其特征在于：主要由組裝在底板上的樣品墊、結(jié)合墊、含有檢測線T和控制線C的硝酸纖維素膜、吸收墊組成；其中，結(jié)合墊固定有抗體5B6標(biāo)記熒光微球和生物素化抗體15F11；檢測線T包被有鏈霉親和素，控制線C包被有羊抗鼠IgG。

2.權(quán)利要求1所述的試紙條的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：

(1)將抗體5B6標(biāo)記的熒光微球和生物素化抗體15F11固定到結(jié)合墊上；

(2)在硝酸纖維素膜上分別劃T線、C線包被鏈霉親和素、羊抗鼠IgG；

(3)將樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜、吸收墊依次相互搭接粘貼于底板上組裝起來，切割得到試紙條。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試紙條的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：

(1)結(jié)合墊的制備：使用1mL含1％Tween-20的0.01mol/L PBS浸泡處理結(jié)合墊30min，取出37℃下干燥2-3h；再將結(jié)合墊加入到100μL抗體5B6標(biāo)記的熒光微球和100μL生物素化抗體15F11的混合液中，浸泡2min后取出37℃下干燥2h；

(2)硝酸纖維素膜的制備：往含5％甲醇、5％海藻糖的0.01mol/L PBS中分別加入鏈霉親和素、羊抗鼠IgG配制2.5μg/μL的鏈霉親和素劃膜液和0.5μg/μL的羊抗鼠IgG劃膜液；將2.5μg/μL的鏈霉親和素劃膜液、0.5μg/μL的羊抗鼠IgG劃膜液分別在硝酸纖維素膜上劃線作為試紙條的T線和C線；將處理完成的硝酸纖維素膜置于37℃下干燥24h；

(3)將樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜、吸收墊依次相互搭接粘貼于底板上組裝起來，切割成試紙條。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試紙條的制備方法，其特征在于：步驟(1)中所述的抗體5B6標(biāo)記的熒光微球通過包括以下步驟的方法制備得到：吸取100μL羧基熒光微球，14400r/min離心10min收集熒光微球，再用1mL 0.1M的MES緩沖液清洗；將清洗的熒光微球、1.0mg EDC及1.0mg NHS加到5mL MES緩沖液中，室溫60r/min離心反應(yīng)45min；收集離心反應(yīng)后的熒光微球，先用1mL 10mM pH7.4的PB緩沖液清洗，再用500μL PB緩沖液復(fù)溶，并加入7.04μL抗體5B6，4℃過夜反應(yīng)；14400r/min離心8min收集過夜反應(yīng)的熒光微球，將微球和125μL BSA加到等體積10mM pH7.4的PB緩沖液中室溫封閉1h，再次14400r/min離心8min收集微球，用1mL10mM PB緩沖液清洗，最后以100μL保存液復(fù)溶，4℃保存。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試紙條的制備方法，其特征在于：步驟(1)中所述的生物素化抗體15F11通過包括以下步驟的方法制備得到：取100μg抗體15F11，按抗體/活化生物素摩爾比為1:100的比例加入NHS-Biotin，總體積為100μL；室溫下培育4h；使用PB緩沖液稀釋至反應(yīng)液體積的5倍，4℃下透析72h，取出備用。

6.權(quán)利要求1所述的試紙條在檢測NT-proBNP中的應(yīng)用。