[發(fā)明專利]一種Hexon蛋白及其制備方法、單克隆抗體與試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711464880.8
• 申請日: 2017-12-28
• 公開（公告）號: CN108456245A
• 公開（公告）日: 2018-08-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 任廣彩;王瀚;閆圓圓;黃妙容;詹烜子;陳瑞愛
• 申請（專利權(quán)）人: 肇慶大華農(nóng)生物藥品有限公司
• 主分類號: C07K14/075
• 分類號: C07K14/075;C12N15/70;C07K16/08
• 代理公司: 廣州市越秀區(qū)哲力專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 44288
• 代理人: 邵穗娟;湯喜友

本發(fā)明公開一種Hexon蛋白，所述Hexon蛋白是由重組載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌誘導(dǎo)獲得的，所述重組載體包括經(jīng)大腸桿菌偏愛密碼子優(yōu)化的hexon基因序列。本發(fā)明同時(shí)還提供該Hexon蛋白的制備方法、以及由該Hexon蛋白獲得的單克隆抗體與試劑盒。本發(fā)明提供的Hexon蛋白的表達(dá)量高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種Hexon蛋白及其制備方法、單克隆抗體與試劑 盒。屬于技術(shù)免疫學(xué)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

腺病毒科根據(jù)形態(tài)結(jié)構(gòu)、免疫學(xué)特性和宿主范圍分為哺乳動物腺 病毒屬、禽腺病毒屬、腺胸腺病毒屬和唾液酸酶病毒屬。禽腺病毒屬 根據(jù)抗原性的不同，分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三個(gè)亞群。Ⅰ群腺病毒分A、B、 C、D、E五個(gè)基因型(種)，12個(gè)血清型。

I群血清4型禽腺病毒可引起雞心包積液肝炎綜合征，是侵害雞 的一種急性傳染病，主要病變?yōu)樾陌挥星辶粱虻S色的水樣或果凍 狀液體，肝臟腫大、局部壞死或褪色甚至有出現(xiàn)包涵體，可通過水平 傳播或垂直傳播，發(fā)病率和致死率很高。1987年巴基斯坦首次報(bào)道 了由I群血清4型禽腺病毒引起的心包積液肝炎綜合征，2012年在我 國出現(xiàn)，至2014年己形成大面積流行，2015-2016年已傳播至全國。 目前該病在我國雞群中的發(fā)病率較高，且呈逐漸上升趨勢。感染宿主 的范圍也越來越廣，白羽肉雞、三黃雞、土雞、種雞、蛋雞、種鴨均 可感染發(fā)病。發(fā)病死亡情況因地區(qū)、品種而異，給我們畜牧業(yè)造成了 很大經(jīng)濟(jì)損失。因此建立檢測I群血清4型禽腺病毒的方法非常重要。

禽腺病毒為無囊膜的裸體病毒，近球形，直徑約70～90nm。電 鏡觀察，其形態(tài)為正20面體，衣殼由252個(gè)中空殼粒構(gòu)成，其中有12個(gè)五鄰體(penton)分別位于該病毒12個(gè)頂上，240個(gè)六鄰體 (hexon)分別位于20個(gè)三角面和30條棱上。其中Hexon是主要的 結(jié)構(gòu)蛋白，含有主要的屬和亞屬特異性抗原決定簇和次要的種特異性 抗原決定簇，是中和抗體的靶目標(biāo)和主要保護(hù)性抗原基因。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的之一在于提供一種表達(dá) 量更高的Hexon蛋白。

本發(fā)明的目的之二在于提供該Hexon蛋白的制備方法。

本發(fā)明的目的之三在于提供由該Hexon蛋白免疫小鼠獲得的單 克隆抗體。

本發(fā)明的目的之四在于提供由包含該Hexon蛋白的試劑盒。

實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的之一可以通過采取如下技術(shù)方案達(dá)到：

一種Hexon蛋白，所述Hexon蛋白是由重組載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌 誘導(dǎo)獲得的，所述重組載體包括經(jīng)大腸桿菌偏愛密碼子優(yōu)化的hexon 基因序列。

進(jìn)一步地，所述優(yōu)化的hexon基因序列如SEQ ID No.1所示。

進(jìn)一步地，所述重組載體的載體為pET-30a(+)載體。

進(jìn)一步地，所述優(yōu)化的hexon基因序列通過Ndel/Xhol酶切位點(diǎn) 構(gòu)建至pET-30a(+)載體。

實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的之二可以通過采取如下技術(shù)方案達(dá)到：

一種Hexon蛋白的制備方法，包括：

基因優(yōu)化步驟：對hexon基因序列進(jìn)行大腸桿菌偏愛密碼子優(yōu)化， 得到優(yōu)化的hexon基因序列；

制備載體步驟：將基因優(yōu)化步驟基因優(yōu)化步驟得到的優(yōu)化的 hexon基因序列克隆到pET-30a(+)載體上，得到重組載體 pET-30a-hexon；

誘導(dǎo)表達(dá)步驟：重組載體pET-30a-hexon轉(zhuǎn)化大腸桿菌，經(jīng)IPTG 于15℃誘導(dǎo)獲得Hexon蛋白。

進(jìn)一步地，基因優(yōu)化步驟中，優(yōu)化的hexon基因序列的序列如 SEQ ID No.1所示。