[發(fā)明專利]一種綿羊脂肪前體細胞的分離方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711464097.1
• 申請日: 2017-12-29
• 公開（公告）號: CN108085297A
• 公開（公告）日: 2018-05-29
• 發(fā)明（設計）人: 趙俊星;張婷;秦旭澤;李戡;王建新
• 申請（專利權）人: 山西農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077
• 代理公司: 北京科億知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

本發(fā)明公開了一種綿羊脂肪前體細胞的分離方法，通過對綿羊脂肪的清洗、消毒、清理、破碎、消化和離心分離等步驟，得到綿羊脂肪前體細胞，并儲放在恒溫培養(yǎng)箱中；本發(fā)明與常規(guī)分離技術相比，分離純度高、不易污染、保留細胞原有的活力，而且分離費用低，分離后的最佳培養(yǎng)環(huán)境易于制造，保證分離后的細胞不分化，保證細胞體外增殖速度，促進了對干細胞研究的發(fā)展，適合推廣使用。

技術領域

本發(fā)明屬于細胞分離領域，更具體地說，尤其涉及一種綿羊脂肪前體細胞的分離方法。

背景技術

前體脂防細胞是一類具有增殖和向成熱脂肪細胞分化的特異化的前體細胞，它的存在和作用持續(xù)于人和動物的一生。在20世紀60年代初，國外即有人開始從事脂肪細胞培養(yǎng)的研究工作。

對前體脂防細胞原代和傳代培養(yǎng)主要使用的是體外分離系統(tǒng)。體外分離的前體脂肪細胞能夠再現(xiàn)體內的生理過程，有助于研究者完整地認識脂肪組織產(chǎn)生和增生的全過程，并且可以直接觀察各種因素對這個過程的調控，是研究脂肪細胞分化，脂肪生成、代謝以及肥胖等各種疾病發(fā)生機理的必備工具。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于提供一種綿羊脂肪前體細胞的分離方法，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術方案：

一種綿羊脂肪前體細胞的分離方法，包括如下步驟：

S1、將綿羊清洗干凈并牽至無菌室中，再使用酒精清洗2-3次，然后將綿羊頸部處死，取出腹股溝脂肪組織5-12g，放入酒精中浸泡10-20s，再放入無菌硫化鉛溶液中；

S2、取出脂肪組織并置入D-Hanks液中漂洗3-6次，去除結締組織和血管，再清洗1-2次，置于無菌燒杯中；

S3、將S2中處理后的脂肪組織切碎，體積不大于1mm3，切碎后加入到恒溫培養(yǎng)基中，加入0.07-0.08%的I型膠原酶，并將恒溫培養(yǎng)基置于37℃的恒溫培養(yǎng)箱中，控制培養(yǎng)箱內二氧化碳的濃度的5%；

S4、使S3中處理后的脂肪組織碎片消化1-2h，完全消化后加入相同體積的完全培養(yǎng)液，終止消化，再通篩網(wǎng)篩除雜質，得到消化后的液體；

S5、將S4中獲取的液體置于離心管中，設定轉速為2000-2200rpm，時間為6-8min，去除上層漂浮的脂肪細胞和上清液，再用完全培養(yǎng)液清洗2-3次后懸重沉淀；

S6、取4-8ml懸重液放到培養(yǎng)皿中，加入12-20ml的完全培養(yǎng)液，混合均勻并置于37℃的恒溫培養(yǎng)箱中。

優(yōu)選的，S5中離心分離2-3次，且每次分離后均用完全培養(yǎng)液清洗2-3次。

優(yōu)選的，S4中先通過200目的篩網(wǎng)篩選2-3次，再使用100目的篩網(wǎng)篩選1-2次。

優(yōu)選的，S2中將去除結締組織和血管后的脂肪組織置于無菌燒杯中，使用無菌處理后封口玻璃蓋住燒杯，再將燒杯放在37℃的恒溫箱中。

與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明與常規(guī)分離技術相比，分離純度高、不易污染、保留細胞原有的活力，而且分離費用低，分離后的最佳培養(yǎng)環(huán)境易于制造，保證分離后的細胞不分化，保證細胞體外增殖速度，促進了對干細胞研究的發(fā)展，適合推廣使用。

具體實施方式

為了使本發(fā)明的目的、技術方案及優(yōu)點更加清楚明白，以下結合具體實施例，對本發(fā)明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。

一種綿羊脂肪前體細胞的分離方法，包括如下步驟：