[發(fā)明專利]一種綿羊脂肪前體細(xì)胞的分離方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201711464097.1 | 申請(qǐng)日： | 2017-12-29 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN108085297A | 公開(kāi)（公告）日： | 2018-05-29 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 趙俊星;張婷;秦旭澤;李戡;王建新 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 山西農(nóng)業(yè)大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12N5/077 | 分類號(hào)： | C12N5/077 |
| 代理公司： | 北京科億知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 湯東鳳 |
| 地址： | 030800*** | 國(guó)省代碼： | 山西;14 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說(shuō)明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 綿羊 脂肪前體細(xì)胞 常規(guī)分離技術(shù) 干細(xì)胞研究 恒溫培養(yǎng)箱 細(xì)胞 分離純度 分離費(fèi)用 培養(yǎng)環(huán)境 原有的 增殖 破碎 脂肪 清洗 消毒 保證 分化 消化 保留 污染 制造 | ||
1.一種綿羊脂肪前體細(xì)胞的分離方法，其特征在于，包括如下步驟：
S1、將綿羊清洗干凈并牽至無(wú)菌室中，再使用酒精清洗2-3次，然后將綿羊頸部處死，取出腹股溝脂肪組織5-12g，放入酒精中浸泡10-20s，再放入無(wú)菌硫化鉛溶液中；
S2、取出脂肪組織并置入D-Hanks液中漂洗3-6次，去除結(jié)締組織和血管，再清洗1-2次，置于無(wú)菌燒杯中；
S3、將S2中處理后的脂肪組織切碎，體積不大于1mm
S4、使S3中處理后的脂肪組織碎片消化1-2h，完全消化后加入相同體積的完全培養(yǎng)液，終止消化，再通篩網(wǎng)篩除雜質(zhì)，得到消化后的液體；
S5、將S4中獲取的液體置于離心管中，設(shè)定轉(zhuǎn)速為2000-2200rpm，時(shí)間為6-8min，去除上層漂浮的脂肪細(xì)胞和上清液，再用完全培養(yǎng)液清洗2-3次后懸重沉淀；
S6、取4-8ml懸重液放到培養(yǎng)皿中，加入12-20ml的完全培養(yǎng)液，混合均勻并置于37℃的恒溫培養(yǎng)箱中。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種綿羊脂肪前體細(xì)胞的分離方法，其特征在于：S5中離心分離2-3次，且每次分離后均用完全培養(yǎng)液清洗2-3次。
3.據(jù)權(quán)利要求1所述的一種綿羊脂肪前體細(xì)胞的分離方法，其特征在于：S4中先通過(guò)200目的篩網(wǎng)篩選2-3次，再使用100目的篩網(wǎng)篩選1-2次。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種綿羊脂肪前體細(xì)胞的分離方法，其特征在于：S2中將去除結(jié)締組織和血管后的脂肪組織置于無(wú)菌燒杯中，使用無(wú)菌處理后封口玻璃蓋住燒杯，再將燒杯放在37℃的恒溫箱中。
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