[發明專利]一種橙紅色熒光的藍細菌光敏色素熒光標記物的制備方法

在審

• 申請號: 201711462376.4
• 申請日: 2017-12-28
• 公開（公告）號: CN108047334A
• 公開（公告）日: 2018-05-18
• 發明（設計）人: 宋建勛;任虎;夏坤;付衛雷;佟順剛
• 申請（專利權）人: 廣州天寶頌原生物科技開發有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 許飛

1.一種融合蛋白，其包括藍細菌光敏色素蛋白alr5272的第1個GAF結構域和鏈霉親和素。

2.根據權利要求1所述的融合蛋白，其特征在于：融合蛋白中還添加有親和標記。

3.根據權利要求1所述的融合蛋白，其特征在于：融合蛋白的序列為：

MGSSHHHHHHSQDPEAGITGTWYNQLGSTFIVTAGADGALTGTYESAVGNAESRYVLTGRYDSAPATDGSGTALGWTVAWKNNYRNAHSATTWSGQYVGGAEARINTQWLLTSGTTEANAWKSTLVGHDTFTKVKPSAASGSGTDDDDKAMADGESLDLETILYQTAKDLRQCLKCDRILIYQIKSDNNGAIVAESTILPNVSLLGKHFRDPCFTGKYKERQGRCCLEIIEDIYAAGVKPCQRDFLASMQVRANIVVPIALKSDLWGLLIAQYCDEPHQWQQIEIDLLKQLATQLGIAIQNTK。

4.表達權利要求1或2所述融合蛋白的核苷酸序列。

5.根據權利要求3所述的核苷酸序列，其特征在于：核苷酸序列根據宿主菌進行密碼子優化。

6.插入有權利要求3或4所述核苷酸序列的質粒。

7.根據權利要求5所述的質粒，其特征在于：質粒為pET Duet載體質粒，核苷酸序列通過酶切位點BamHⅠ、EcoRⅠ插入pET Duet載體質粒的多克隆位點1。

8.一種融合蛋白的制備方法，包括如下步驟：

1)根據權利要求1或2所述融合蛋白的序列，設計得到融合蛋白基因序列；

2)將融合蛋白基因序列插入到質粒中，得到融合蛋白質粒；

3)將融合蛋白質粒和表達藻紅膽素合成的相關基因：血紅素氧化酶基因ho1，膽綠素還原酶基因pebS的質粒共轉入大腸桿菌，得到基因工程菌；

4)使用三級接種方法在培養基中接種基因工程菌，37℃發酵培養至生長前期；

5)降溫至20℃，培養0.8～1.2h；

6)升溫至25℃，加入終質量濃度為1.3～1.6％的乳糖誘導培養14～16h；

7)收集菌體提取、純化得到融合蛋白。

9.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于：發酵培養基的質量組成為：蛋白胨1％，酵母粉0.5％，氯化鈉1％，甘油0.4％，0.004％～0.04％豬血球蛋白粉或血紅素，余量為水，pH值調至7.2。

10.根據權利要求8或9所述的制備方法，其特征在于：加入終質量濃度為1.5％的乳糖誘導培養。