[發(fā)明專利]一種量子點熒光編碼微球—滾環(huán)擴增高通量篩選G-四鏈體DNA的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711461031.7
• 申請日: 2017-12-28
• 公開（公告）號: CN108085369B
• 公開（公告）日: 2021-07-09
• 發(fā)明（設計）人: 孫清江;屈曉君;卞非卡;劉玉乾
• 申請（專利權）人: 東南大學
• 主分類號: C12Q1/682
• 分類號: C12Q1/682
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 孫斌

1.量子點熒光編碼微球—滾環(huán)擴增篩選G-四鏈體DNA的方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）制備標記探針的量子點熒光編碼微球；

（2）靶標G-四鏈體DNA序列在量子點熒光編碼微球表面進行滾環(huán)擴增反應；

（3）通過G-四鏈體特異性識別分子對步驟（2）量子點熒光編碼微球表面滾環(huán)擴增產(chǎn)物進行染色；

（4）使用流式細胞儀對G-四鏈體DNA進行篩選；

步驟（1）所述標記探針包括三種捕獲探針和三種鎖式探針；所述捕獲探針包括用于k-ras 基因中G-四鏈體序列篩選的第一捕獲探針capture 1，用于bcl-2基因中G-四鏈體序列篩選的第二捕獲探針capture 2，用于染色體端粒區(qū)域末端telo G-四鏈體序列篩選的第三捕獲探針capture 3，三種捕獲探針的5'端氨基化修飾；所述鎖式探針包括與capture 1雜交的第一鎖式探針padlock 1；與capture 2雜交的第二鎖式探針padlock 2；與capture 3雜交的第三鎖式探針padlock 3；三種鎖式探針的5’端磷酸化修飾；所述制備標記探針的量子點熒光編碼微球為分別將三種捕獲探針偶聯(lián)至量子點熒光編碼微球表面，并分別與相應的三種鎖式探針雜交，制成三種標記探針的量子點熒光編碼微球；步驟（2）所述量子點熒光編碼微球表面進行滾環(huán)擴增反應，三種靶標G-四鏈體DNA序列與量子點熒光編碼微球表面相應鎖式探針雜交并連接成環(huán)，進行滾環(huán)擴增反應；所述三種靶標G-四鏈體DNA序列分別為k-ras基因的G-四鏈體DNA序列target 1用于雜交padlock 1，bcl-2基因的G-四鏈體DNA序列target 2用于雜交padlock 2，染色體端粒區(qū)域末端telo G-四鏈體DNA序列target 3用于雜交padlock 3；capture 1、capture 2、capture 3分別如序列SEQ ID NO.1、SEQ IDNO.4、SEQ ID NO.7所示；padlock 1、padlock 2、padlock 3分別如序列SEQ ID NO.2、SEQID NO.5、SEQ ID NO.8所示；target 1、target 2、target 3分別如序列SEQ ID NO.3、SEQID NO.6、SEQ ID NO.9所示。

2.根據(jù)權利要求1所述的的量子點熒光編碼微球—滾環(huán)擴增篩選G-四鏈體DNA的方法，其特征在于，步驟（2）所述量子點熒光編碼微球表面進行滾環(huán)擴增反應的時間為20、40、60、80或100 分鐘。

3.根據(jù)權利要求1所述的量子點熒光編碼微球—滾環(huán)擴增篩選G-四鏈體DNA的方法，其特征在于，步驟（3）所述G-四鏈體特異性識別分子為大環(huán)分子酞菁鋅或者配位化合物釕化合物。

4.根據(jù)權利要求1所述的量子點熒光編碼微球—滾環(huán)擴增篩選G-四鏈體DNA的方法，其特征在于，步驟（4）所述使用流式細胞儀對G-四鏈體DNA進行篩選，通過流式細胞儀對量子點熒光編碼微球進行分析，編碼信號用于靶標識別，報告信號用于靶標含量標定，從而實現(xiàn)G-四鏈體DNA篩選。