[發(fā)明專利]一種熒光檢測試劑及制備方法及用于皮膚膽固醇的測量系統(tǒng)及方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711460983.7
• 申請日: 2017-12-28
• 公開（公告）號: CN108204963B
• 公開（公告）日: 2020-07-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉勇;王貽坤;倪敬書;董美麗
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽易康達光電科技有限公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 北京科迪生專利代理有限責(zé)任公司 11251
• 代理人: 安麗

本發(fā)明涉及一種熒光檢測試劑及制備方法及用于皮膚膽固醇的測量系統(tǒng)及方法，屬于醫(yī)學(xué)和光學(xué)等領(lǐng)域，將可以和膽固醇結(jié)合的毛地黃皂苷上通過化學(xué)手段連接上不同的熒光基團，通過配套的檢測設(shè)備和檢測材料，由檢測到的熒光信號強弱即可反映皮膚膽固醇的含量，從而實現(xiàn)對與皮膚膽固醇相關(guān)疾病如患心血管疾病的風(fēng)險進行評估，進而達到早期預(yù)警和防治的效果，指導(dǎo)人們合理規(guī)劃自己的飲食與運動習(xí)慣，使身體始終處于健康的狀態(tài)。本發(fā)明采用了高靈敏度的熒光檢測試劑克服了皮膚膽固醇含量低而難以檢測的缺點，實現(xiàn)了皮膚膽固醇的無創(chuàng)、快速、靈敏檢測。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)及光學(xué)等領(lǐng)域，尤其涉及檢測試劑在慢病預(yù)測與防治應(yīng)用領(lǐng)域，特別涉及一種熒光檢測試劑及制備方法及用于皮膚膽固醇的測量系統(tǒng)及方法。

背景技術(shù)

隨著人口老年化的加重與飲食習(xí)慣的改變，動脈粥樣硬化類疾病的患病比例逐步上升，此類疾病屬于慢性疾病范疇，一旦發(fā)病后非常難以逆轉(zhuǎn)，而且，由手術(shù)治療帶來的痛苦嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，鑒于此，急需要發(fā)展一種可以早期預(yù)警該類疾病的標(biāo)志物和檢測方法。

研究表明，高膽固醇血癥與動脈粥樣硬化具有很大的相關(guān)性。血漿總膽固醇、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)含量的測定是預(yù)測動脈粥樣硬化類疾病廣泛的使用方法之一，但是這些測量需要采集長時間空腹人群的血液，以排除食物中膽固醇的影響，而且，抽血為有創(chuàng)，增加了感染風(fēng)險，檢測設(shè)備一般比較昂貴，檢測時間相對較長，所有這些因素均限制了其廣泛應(yīng)用，從而達不到大面積篩查的作用。

近年來，隨著對膽固醇認識的加深，發(fā)現(xiàn)皮膚表皮中的膽固醇和動脈粥樣硬化的發(fā)病密切相關(guān)，而且，通過對表皮膽固醇的測量，可對亞臨床的動脈粥樣硬化進行預(yù)測，從而可以實現(xiàn)早期動脈粥樣硬化的預(yù)警，實現(xiàn)從飲食和生活方式上進行干涉，遏制疾病的繼續(xù)發(fā)展。

皮膚活檢可以對皮膚表面膽固醇進行測量，但是鑒于其獲取樣本比較痛苦、容易感染、所取樣本涵蓋表皮、真皮甚至皮下脂肪導(dǎo)致測量的并不是單純的表皮膽固醇等原因，從而限制了其發(fā)展。

近年來，一種基于A-C-B試劑的皮膚膽固醇測量方法被廣泛應(yīng)用，該方法中A是可以與膽固醇具有親和力的試劑，B為酶催化可視化試劑，C為將檢測試劑與可視化試劑連接的結(jié)合試劑。預(yù)先將A-C-B加到測量皮膚表面，一段時間后，A-C-B與皮膚表面的膽固醇結(jié)合，再將顯色試劑加入到檢測皮膚表面，顯色試劑在酶的催化下可以生成有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的顏色和皮膚表面膽固醇的含量呈正比例關(guān)系，再通過光學(xué)方法如吸收法、散射法等檢測。該方法中涉及到兩種試劑，即結(jié)合試劑和顯色試劑，整個測量過程大概4-5min，檢測時間較長；另外，顯色試劑加到檢測部位后，顏色會隨著時間的延長而逐步加深，所以需要嚴(yán)格控制顯色試劑的檢測時間，超過幾秒鐘就會導(dǎo)致測量結(jié)果差別很大，因此需要對檢測的時間把握非常嚴(yán)格；再者，上述A-C-B試劑中涉及到生物大分子(酶)、聚合物和小分子，合成過程比較復(fù)雜，對于每一步合成產(chǎn)物的質(zhì)量難以控制，加以酶活性容易受到溫度、PH等環(huán)境因素的影響，保存時間相對比較短。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明技術(shù)解決問題：克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種熒光檢測試劑及制備方法及用于皮膚膽固醇的測量系統(tǒng)及方法，通過一種熒光檢測試劑結(jié)合熒光光譜信息即可對皮膚膽固醇進行測量，該種熒光檢測試劑的引入代替了原來的兩種試劑，使得檢測時間從原來的4-5min變成了2-3min，進一步縮短了檢測時間，提高被檢測人的依從性；由于此種檢測方法是直接測量檢測部位的熒光，克服了原顯色試劑需要嚴(yán)格控制顯色時間的問題；另外，本檢測試劑為小分子化合物，相對于原包含有含生物大分子(酶)、聚合物和小分子的檢測試劑，合成過程中每一步中間產(chǎn)物的質(zhì)量控制簡單，在保存過程和檢測過程中亦不易受環(huán)境因素的影響。

本發(fā)明技術(shù)解決方案：一種熒光檢測試劑，用于皮膚膽固醇熒光測量，所述熒光檢測試劑包括洋地黃皂苷和熒光基團，二者之間通過一個10-20個原子的親水鏈連接，親水鏈一方面提高檢測試劑的水溶性；另一方面長親水鏈的存在也會使熒光基團的引入而不對洋地黃皂苷本身性質(zhì)造成影響。