[發明專利]一種基因編輯系統及其制備方法和應用有效
| 申請號： | 201711459376.9 | 申請日： | 2017-12-28 |
| 公開（公告）號： | CN108118057B | 公開（公告）日： | 2021-04-06 |
| 發明（設計）人： | 吳文書 | 申請（專利權）人： | 吳文書 |
| 主分類號： | C12N15/113 | 分類號： | C12N15/113;C12N15/90;C12N9/22;A61K48/00;A61P7/04 |
| 代理公司： | 北京品源專利代理有限公司 11332 | 代理人： | 鞏克棟 |
| 地址： | 江蘇省蘇州市昆山*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基因 編輯 系統 及其 制備 方法 應用 | ||
1.一種基因供體，其特征在于，所述基因供體按照5’-3’方向順次包括：gRNA識別序列、剪接受體序列、凝血因子VIII基因23-26號外顯子序列、轉錄終止信號序列和gRNA識別序列；
所述gRNA識別序列與靶標DNA序列反向互補。
2.根據權利要求1所述的基因供體，其特征在于，所述gRNA識別序列如SEQ ID NO.3-4所示。
3.一種基因編輯系統，其特征在于，所述基因編輯系統包括gRNA和Cas9蛋白表達載體；
所述gRNA的核酸序列如SEQ ID NO.1-2所示；
所述基因編輯系統還包括如權利要求1或2所述的基因供體。
4.一種制備如權利要求3所述的基因編輯系統的方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)設計gRNA的引物，變性后冷卻至室溫，得到所述gRNA；
(2)將gRNA克隆到表達載體上，得到表達gRNA的載體；
(3)將基因供體克隆到表達載體上，得到所述基因編輯系統。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟(1)所述gRNA的引物如SEQ ID NO.5-8所示。
6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟(1)所述變性的溫度為95-98℃。
7.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟(2)所述表達載體為pSpCas9 BB-2A-GFP質粒。
8.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)設計gRNA的引物，在95-98℃變性后冷卻至室溫，得到所述gRNA；
(2)將gRNA克隆到pSpCas9 BB-2A-GFP質粒上，得到表達gRNA的載體；
(3)將基因供體克隆到表達載體上，得到所述基因編輯系統。
9.一種藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物包括如權利要求3所述的基因編輯系統。
10.根據權利要求9所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物還包括藥學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑中的任意一種或至少兩種的組合。
11.一種如權利要求3所述的基因編輯系統和/或如權利要求9或10所述的藥物組合物在制備修復凝血因子VIII基因22號內含子倒位和/或血友病的藥物或試劑中的應用。
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