[發明專利]用于生活污水處理的含有脂肪酶基因的重組工程菌及其構建方法

有效

• 申請號: 201711458989.0
• 申請日: 2017-12-28
• 公開（公告）號: CN108251345B
• 公開（公告）日: 2021-07-20
• 發明（設計）人: 謝悅波;姚竣耀;劉才群
• 申請（專利權）人: 江蘇世邦生物工程科技有限公司
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/70;C12N15/62;C07K19/00;C02F3/34;C12N11/02;C02F101/16
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 王艷

本發明公開了一種含有脂肪酶基因的重組工程菌及其構建方法。本發明還公開了一種融合蛋白sole?LIPY7。本發明還公開了重組工程菌株BL21?pCAMBIA1301?sole?LIPY7在污水處理中的應用。本發明還公開了一種污水處理方法。本發明首次將sole基因和脂肪酶基因LIPY7融合獲得融合基因sole?lip?948，并成功構建重組工程菌株BL21?pCAMBIA1301?sole?LIPY7。本發明首次將該融合蛋白sole?LIPY7與進行固定化獲得固定化脂肪酶，該固定化脂肪酶酶活高達200U/ml。本發明的固定化脂肪酶能高效處理生活污水，CODcr去除率高達96.8%，BOD去除率高達96.1%，氨氮去除率高達85.6%。

技術領域

本發明屬于污水處理技術領域，特別涉及用于生活污水處理的含有脂肪酶基因的重組工程菌及其構建方法。

背景技術

隨著我國的經濟發展，社會的進步促進了工農提高，隨之也帶來了不同程度的環業生產能力得到境污染，特別是污水成為了環境污染的來源之一，污水的污染程度也日益嚴重，逐漸由低向高演變，處理污水的難度也日益加大。

目前，污水處理的方法主要有物理、化學和生物處理方法，其中，生物處理方法是利用微生物產生的酶進行對污水中的油脂進行水解從而達到凈化污水的目的。近年來有不少研究者將脂肪酶用于污水處理獲得了很大的進展。決定脂肪酶表達的因素有很多，比如宿主、外源基因、外界環境等因素，目前雖然有少數脂肪酶基因已經得到克隆和測序，但是克隆到工程菌中后，基本都用于洗滌業、食品加工、生物制藥、環境生物技術等領域，很少有能成功用于污水處理的相關報道。而且目前也沒有將融合基因用于污水處理領域的報道。

發明內容

發明目的：為了克服現有技術的不足，本發明所要解決的技術問題是提供了一種含脂肪酶基因的工程菌的構建方法。本發明采用融合基因技術，采用重疊PCR技術將脂肪酶基因LIPY7與sole基因成功融合表達獲得了融合基因sole-LIPY7。該融合基因sole-LIPY7是通過上海生工生物公司合成獲得。

本發明還要解決的技術問題是提供了所述的構建方法獲得的工程菌。

本發明還要解決的技術問題是提供了所述的構建方法獲得的工程菌的高效表達。

本發明最后要解決的技術問題是提供了該含有脂肪酶基因的工程菌在污水處理中的應用。

技術方案：為了解決上述技術問題，本發明提供了一種含有脂肪酶基因的重組工程菌的構建方法，包括以下步驟：

1)融合基因soe-LIPY7的獲得；

2)將融合基因sole-LIPY7導入表達載體pCAMBIA1301中獲得重組表達載體pCAMBIA1301-sole-LIPY7；

3)將重組表達載體pCAMBIA1301-sole-LIPY7轉化到大腸桿菌BL21中，挑取陽性克隆LB培養基中過夜培養得到重組工程菌株BL21-pCAMBIA1301-sole-LIPY7。

其中，上述融合基因sole-LIPY7的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。本發明中的LIPY7基因序列參見序列表SEQ ID NO：2所示。本發明中的sole基因序列參見序列表SEQ IDNO：3所示。

本發明內容還包括上述的構建方法獲得的重組工程菌株BL21-pCAMBIA1301-sole-LIPY7。

其中，上述重組工程菌株BL21-pCAMBIA1301-sole-LIPY7的培養溫度為40～50℃。

本發明內容還包括一種融合蛋白sole-LIPY7，所述融合蛋白sole-LIPY7是通過將所述的重組工程菌株BL21-pCAMBIA1301-sole-LIPY7進行誘導表達獲得。