[發(fā)明專利]一種源于光敏色素的黃色熒光標(biāo)記物的制備方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201711458455.8
• 申請日: 2017-12-28
• 公開（公告）號: CN108164604A
• 公開（公告）日: 2018-06-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 吳明;盧艷華;陳彥蓉;夏坤;佟順剛
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州天寶頌原生物科技開發(fā)有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44205
• 代理人: 許飛

1.一種融合蛋白，其包括藍(lán)細(xì)菌光敏色素蛋白slr1393的第3個GAF結(jié)構(gòu)域和鏈霉親和素。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的融合蛋白，其特征在于：融合蛋白中還添加有親和標(biāo)記。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的融合蛋白，其特征在于：融合蛋白的序列為：

MGSSHHHHHHSQDPEAGITGTWYNQLGSTFIVTAGADGALTGTYESAVGNAESRYVLTGRYDSAPATDGSGTALGWTVAWKNNYRNAHSATTWSGQYVGGAEARINTQWLLTSGTTEANAWKSTLVGHDTFTKVKPSAASGSGTDDDDKAMADGLQNIFRATSDEVRHLLSCDRVLVYRFNPDWSGEFIHESVAQMWEPLKDLQNNFPLWQDTYLQENEGGRYRNHESLAVGDVETAGFTDCHLDNLRRFEIRAFLTVPVFVGEQLWGLLGAYQNGAPRHWQAREIHLLHQIANQLGVAVYQAQLLARFQE。

4.表達(dá)權(quán)利要求1或2所述融合蛋白的核苷酸序列。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的核苷酸序列，其特征在于：核苷酸序列根據(jù)宿主菌進(jìn)行密碼子優(yōu)化。

6.插入有權(quán)利要求3或4所述核苷酸序列的質(zhì)粒。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的質(zhì)粒，其特征在于：質(zhì)粒為pET Duet載體質(zhì)粒，核苷酸序列通過酶切位點(diǎn)BamHⅠ、EcoRⅠ插入pET Duet載體質(zhì)粒的多克隆位點(diǎn)1。

8.一種融合蛋白的制備方法，包括如下步驟：

1)根據(jù)權(quán)利要求1或2所述融合蛋白的序列，設(shè)計得到融合蛋白基因序列；

2)將融合蛋白基因序列插入到質(zhì)粒中，得到融合蛋白質(zhì)粒；

3)將融合蛋白質(zhì)粒和表達(dá)藻紅膽素合成的相關(guān)基因：血紅素氧化酶基因ho1，膽綠素還原酶基因pebS的質(zhì)粒共轉(zhuǎn)入大腸桿菌，得到基因工程菌；

4)使用三級接種方法在培養(yǎng)基中接種基因工程菌，37℃發(fā)酵培養(yǎng)至生長前期；

5)降溫至20℃，培養(yǎng)0.8～1.2h；

6)升溫至25℃，加入終質(zhì)量濃度為1.3～1.6％的乳糖誘導(dǎo)培養(yǎng)14～16h；

7)收集菌體提取、純化得到融合蛋白。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于：發(fā)酵培養(yǎng)基的質(zhì)量組成為：蛋白胨1％，酵母粉0.5％，氯化鈉1％，甘油0.4％，0.004％～0.04％豬血球蛋白粉或血紅素，余量為水，pH值調(diào)至7.2。

10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的制備方法，其特征在于：加入終質(zhì)量濃度為1.5％的乳糖誘導(dǎo)培養(yǎng)。