[發明專利]一種獨一味藥材及其制劑的UPLC指紋圖譜檢測方法

在審

• 申請號: 201711455446.3
• 申請日: 2017-12-28
• 公開（公告）號: CN109975439A
• 公開（公告）日: 2019-07-05
• 發明（設計）人: 鄧蕓;黃勝;葉惠煊;周良;袁利群
• 申請（專利權）人: 九芝堂股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種獨一味藥材及其制劑的UPLC指紋圖譜檢測方法，其特征在于包括如下步驟：

(1)對照品溶液的制備：

分別稱取胡麻屬苷、咖啡酸、綠原酸、山梔苷甲酯、馬錢苷、8-O-乙酰山梔苷甲酯、連翹酯苷B、木犀草苷、毛蕊花糖苷、異毛蕊花糖苷對照品，置于容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，制成對照品溶液；

(2)供試品溶液的制備：

分別稱取獨一味藥材、獨一味制劑粉末(過四號篩)，置具塞三角錐形瓶中，加乙醇或10～50％甲醇或水，稱重，回流提取45～75min，放冷，再稱定重量，用同種溶劑補重，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液，即分別得到獨一味藥材及其制劑供試品溶液；

(3)UPLC檢測：

色譜條件為：色譜柱為C₁₈反相色譜柱(2.1×150mm,1.7μm)；柱溫為30～40℃；檢測波長為235nm；流動相A為乙腈，流動相B為0.1％～0.5％甲酸溶液，梯度洗脫，總流速為0.3～0.6ml/min，分析時間62分鐘；所述梯度洗脫順序表如下：

表1梯度洗脫順序表

(4)以8-O-乙酰山梔苷甲酯為參照峰的標準指紋圖譜的制定

吸取步驟(1)(2)所得的對照品溶液、獨一味藥材供試品溶液、獨一味制劑供試品溶液各4μl，分別注入超高效液相色譜儀中，照高效液相色譜法測定，記錄色譜圖；依據所得的10批獨一味藥材、10批獨一味制劑的指紋圖譜，制定標準指紋圖譜；所述獨一味藥材的標準指紋圖譜具有23個特征峰，其中16號峰為8-O-乙酰山梔苷甲酯，所述獨一味制劑的標準指紋圖譜具有21個特征峰，其中15號峰為8-O-乙酰山梔苷甲酯；

(5)指紋圖譜的質量控制

將獨一味藥材及其制劑指紋圖譜與步驟(4)制定的標準指紋圖譜進行比較，計算相似度，識別所具有的共有色譜峰的數量，確定相似度。

2.根據權利要求1所述的獨一味藥材及其制劑的UPHC指紋圖譜檢測方法，其特征在于其特征在于，所述步驟(1)對照品溶液的制備為：

分別稱取胡麻屬苷、咖啡酸、綠原酸、山梔苷甲酯、馬錢苷、8-O-乙酰山梔苷甲酯、連翹酯苷B、木犀草苷、毛蕊花糖苷、異毛蕊花糖苷對照品各5mg，置于容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，制成含對照品0.05mg/ml的對照品溶液；

所述步驟(2)供試品溶液的制備為：

分別稱取獨一味藥材、獨一味制劑粉末(過四號篩)0.8～1.2g，置具塞三角錐形瓶中，加乙醇或10～50％甲醇或水25ml，稱重，回流提取60min，放冷，再稱定重量，用同種溶劑補重，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液，即分別得到獨一味藥材及其制劑供試品溶液。

3.根據權利要求1或2所述的獨一味藥材及其制劑的UPLC指紋圖譜檢測方法，其特征在于：所述步驟(3)中流動相B為0.1％甲酸溶液。

4.根據權利要求1或2所述的獨一味藥材及其制劑的UPLC指紋圖譜檢測方法，其特征在于：所述步驟(3)中總流速為0.5ml/min。

5.根據權利要求1或2所述的獨一味藥材及其制劑的UPLC指紋圖譜檢測方法，其特征在于：所述步驟(2)中微孔濾膜的孔徑為0.22μm。

6.根據權利要求1或2所述的獨一味藥材及其制劑的UPLC指紋圖譜檢測方法，其特征在于：所述獨一味藥材指紋圖譜是由23個共有指紋峰構成，以16號峰即8-O-乙酰山梔苷甲酯特征峰為參照峰，計算所得各共有峰的相對保留時間及相對峰面積見表1：

表1獨一味藥材指紋圖譜23個共有指紋峰的相對保留時間及相對峰面積

7.根據權利要求1或2所述的獨一味藥材及其制劑的UPLC指紋圖譜檢測方法，其特征在于：所述獨一味制劑指紋圖譜是由21個共有指紋峰構成，以15號峰即8-O-乙酰山梔苷甲酯特征峰為參照峰，計算所得各共有峰的相對保留時間及相對峰面積見表2：

表2獨一味制劑指紋圖譜21個共有指紋峰的相對保留時間及相對峰面積