[發(fā)明專利]一種GS表達(dá)系統(tǒng)細(xì)胞株的篩選方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711452716.5
• 申請(qǐng)日: 2017-12-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108085337B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-10-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張文宇;馬燕玲;阮卡;鄒有土;王明灶;葛平輝;章永壘;陳星
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 未名生物醫(yī)藥有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/85
• 分類號(hào): C12N15/85;C12N15/64;C12N5/10
• 代理公司: 廈門(mén)市精誠(chéng)新創(chuàng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 35218
• 代理人: 秦華

1.一種GS表達(dá)系統(tǒng)細(xì)胞株的篩選方法，其特征在于，篩選步驟如下：

S1：含目的基因的表達(dá)載體轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞后在蛋氨酸亞氨基代砜加壓條件下，于37℃，5％CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3～4周,檢測(cè)發(fā)酵液表達(dá)量，根據(jù)OD值篩選出陽(yáng)性克隆細(xì)胞；將所得的陽(yáng)性克隆細(xì)胞放大培養(yǎng)到細(xì)胞活率達(dá)到85％以上；

S2：對(duì)S1所得陽(yáng)性克隆細(xì)胞用有限稀釋法進(jìn)行單克隆化篩選，篩選時(shí)需在96孔板中加入密度為1×10⁴～1×10⁵個(gè)/孔的宿主細(xì)胞并于37℃，5％CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，3～5周后觀察96孔板中細(xì)胞生長(zhǎng)情況，檢測(cè)發(fā)酵液表達(dá)量，篩選出陽(yáng)性單克隆細(xì)胞株，即得GS表達(dá)系統(tǒng)細(xì)胞株；

所述宿主細(xì)胞為CHOK1SV細(xì)胞或敲除了GS基因的CHO細(xì)胞；

所述檢測(cè)發(fā)酵液表達(dá)量的方法為HPLC法或ELISA法。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的GS表達(dá)系統(tǒng)細(xì)胞株的篩選方法，其特征在于，所述含目的基因的表達(dá)載體為GS合成酶—CMV啟動(dòng)子—輕鏈—CMV啟動(dòng)子—重鏈的重組質(zhì)粒。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的GS表達(dá)系統(tǒng)細(xì)胞株的篩選方法，其特征在于，所述GS表達(dá)系統(tǒng)為將攜帶GS基因的表達(dá)載體轉(zhuǎn)染至宿主細(xì)胞；所述表達(dá)載體的GS基因下游插入了抗體重鏈和輕鏈基因。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的GS表達(dá)系統(tǒng)細(xì)胞株的篩選方法，其特征在于，S1中所述表達(dá)載體為含GS基因的真核表達(dá)載體。