[發明專利]一種從混合物中分離天然序列神經生長因子的方法

有效

• 申請號: 201711452346.5
• 申請日: 2017-12-28
• 公開（公告）號: CN107973848B
• 公開（公告）日: 2020-10-16
• 發明（設計）人: 張文宇;黃奮飛;陳振雄;馬大壯;章永壘;陳星
• 申請（專利權）人: 未名生物醫藥有限公司
• 主分類號: C07K14/48
• 分類號: C07K14/48;C07K1/18
• 代理公司: 廈門市精誠新創知識產權代理有限公司 35218
• 代理人: 秦華

1.一種從混合物中分離天然序列神經生長因子的方法，該混合物為含有人神經生長因子的溶液，其特征在于，先采用強陽離子交換層析；再采用金屬離子螯合層析對混合物進行分離純化，最后采用高效強陽離子交換層析分離純化得到天然神經生長因子；

其中，所述混合物為含有人神經生長因子的溶液為真核表達的人神經生長因子溶液，pH為6.5-8.5，鹽濃度為0.1M-1.0M；所述溶液為發酵液上清；溶液中含有多聚體及不正確水解加工的變體；所述神經生長因子的序列為SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2；

所述金屬離子螯合層析樹脂由支持介質、螯合配基和金屬離子組成；所述金屬離子螯合于螯合配基上；螯合配基為含有3個配位位點的螯合物；所述金屬離子為Zn²⁺；

所述分離純化的洗脫條件為改變蛋白質與金屬離子配位結合的競爭性物質濃度梯度；采用上升pH梯度和上升氯化銨濃度梯度；

分離純化的平衡緩沖液的pH為7.5，鹽濃度為0.1M；洗脫緩沖液pH值為8.5，洗脫緩沖液中的競爭劑濃度為1.5M；競爭劑為NH₄⁺鹽。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述強陽離子交換層析為，將所述混合物在pH5.5-6.5，電導低于15mS/cm的條件下加樣至顆粒直徑為40-90μm的強陽離子交換層析樹脂上，用含0.6M NaCl，pH 5.5-6.5的緩沖液梯度洗脫。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述強陽離子交換層析樹脂為SPSepharose FF。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述高效強陽離子交換層析為，將采用金屬螯合層析所得樣品在pH8.0-8.5，電導低于5mS/cm的條件下加樣至顆粒直徑為15-40μm的高效強陽離子交換層析樹脂上，用含0.3M NaCl，pH8.0-8.5的緩沖液梯度洗脫；所述高效強陽離子交換層析樹脂為SP Sepharose HP、Macro-Prep 25S Resin或Fractogel EMD SO3-(S)。